由於紫外-可見分光光度法在食品分析中的應用很廣,如在食品的營養成分、限製性成分及有害成分分析等方麵都有相當廣泛應用。該方法由於操作方便,成本低等優點,在食品衛生國家標準中被廣泛采用。紫外-可見分光光度法在食品衛生國家標準中的主要應用情況如下:
食物中磷的測定方法GB/T 12393—1990
食品中環己基氨基磺酸鈉的測定方法第二法GB 13112—1991
食品中總砷的測定方法第三法GB/T 5009.11—1996
食品中鉛的測定方法第三法GB/T 5009.12—1996
食品中銅的測定方法第二法GB/T 5009.13—1996
食品中鋅的測定方法第二、三法GB/T 5009.14—1996
食品中鎘的測定方法第三法GB/T 5009.15—1996
食品中錫的測定方法GB/T 5009.16—1996
食品中總汞的測定方法第二法GB/T 5009.17—1996
食品中氟的測定方法第一、二法GB/T 5009.18—1996
糧、油、菜中西維因殘留量的測定方法第二法GB/T 5009.21—1996
食品中黃曲黴毒素B1的測定方法第二法GB/T 5009.22—1996
食品中亞硝酸鹽與硝酸鹽的測定方法第一法GB/T 5009.33—1996
食品中亞硫酸鹽的測定方法第一法GB/T 5009.34—1996
食品包裝材料聚酯樹脂中銻的測定方法第二法GB/T 13120—1996
食品中鍺的測定第三法 GB/T 17337—1998
食品中植酸的測定GB/T 17406—1998
在科學研究及產品檢驗等分析實驗中,作為研究的輔助手段更是常常用到。在此僅舉兩個分析實例,以便於加深對紫外-可見分光光度法的理解和掌握。
一、標準曲線法測定肉製品中亞硝酸鹽的含量
1.原理
肉製品搗碎後經處理除去蛋白質及脂肪,將亞硝酸鹽分離於溶液中;在酸性條件下與對氨基苯磺酸重氮化後,再與萘基鹽酸二氨基乙烯偶合生成紅色絡合物,於540nm波長處測光密度,用標準曲線法計算其含量。或者將含亞硝酸鹽的溶液,在酸性條件下與對氨基苯磺酸重氮化後,再與α-萘胺偶合生成紫紅色,於波長525nm處測光密度,用標準曲線法計算其含量。
2.樣品處理
(1)肉製品(紅燒類除外)稱取經搗碎混勻的樣品5g於50mL燒杯中,加硼砂飽和溶液12.5mL,攪勻,以70℃左右的水約300mL將樣品全部洗入500mL的容量瓶中,置沸水浴中加熱15min。取出,一麵搖動一麵滴加硫酸鋅溶液2.5mL,以沉澱蛋白質。冷卻至室溫,加水至刻度,搖勻,放置片刻,撇去上層脂肪,溶液用濾紙過濾,濾液必須澄清備用。
(2)紅燒肉類按肉製品操作製成濾液後,取濾液60mL,置於100mL容量瓶中,加氫氧化鋁乳液至刻度,過濾,濾液應無色透明,備用。
3.測定
精密吸取上述樣液40mL於50mL容量瓶中,另精密吸取5μg/mL的亞硝酸鈉標準溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.5、2.0,2.5mL分別置於一組50mL容量瓶中。樣液與標準瓶中各加0.4%對氨基苯磺酸溶液2mL,混勻,靜置3~5min後,各加入0.2% N-(1-萘基)-乙二胺二鹽酸鹽溶液1mL,加水至刻度,混勻。靜置15min後,用不含亞硝酸鈉標準溶液的容量瓶中溶液作空白溶液調節零點,於波長540nm處測定樣品溶液及標準品溶液的吸光度,繪製標準曲線。
4.計算
首先根據樣品溶液的吸光度A及標準曲線,求出樣品溶液中亞硝酸鹽(以亞硝酸鈉計)的濃度c,再根據稀釋的倍數計算肉製品中亞硝酸鹽(以亞硝酸鈉計)含量X1(mg/kg):
X1=c/(m×40/500)
紅燒肉類中亞硝酸鹽(以亞硝酸鈉計)含量X2(mg/kg):