正文 紫外-可見分光光度法在食品檢測中的應用舉例(2 / 2)

X2=c/(m×60/500×40/100)

式中c——測定用樣液中亞硝酸鹽的含量(以亞硝酸鈉計,μg)

m——樣品質量,g

二、雙波長等吸收點法測定銀杏果仁中直鏈澱粉和支鏈澱粉

銀杏是我國的珍貴植物資源,有極大的利用價值,銀杏果仁中含有大量澱粉。澱粉有直鏈澱粉和支鏈澱粉,支鏈澱粉含量愈高,銀杏的品質愈好。

1.原理

(1)根據朗伯-比爾定律待測溶液,在波長對λ1和λ2處的吸光度Aλ1和Aλ2的差值ΔA與待測物質的濃度成正比關係:

ΔA=Aλ1-Aλ2=(ελ1-ελ2)Lc

式中ελ1、ελ2——摩爾吸收係數

L——光程

c——待測物質濃度

(2)對於含兩個組分α和β的溶液,當在波長對λ1和λ2處測定混合溶液的吸光度時,根據吸光度加和性質。

(3)在pH 3的條件下,室溫顯色反應10min以上,直鏈澱粉和支鏈澱粉能與碘分別形成穩定的有色複合物,可以采用可見分光光度法進行測量。

2.標準溶液的配製

(1)標準儲藏液準確稱取100mg直鏈澱粉和支鏈澱粉標準品於100mL容量瓶中,用2mol/L的KOH溶液10mL在75~80℃水浴中,分散溶解10min,再用濃稀HCl調節的調節溶液pH=3,用去離子水定容至刻度,即成1mg/mL的標準儲藏液。

(2)直鏈澱粉標準工作液分別移取0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0,1.2,1.4,1.6,1.8mL直鏈澱粉標準儲藏液於50mL容量瓶中,加1mL碘試劑(碘試劑:按常規方法配製成2mgmL的碘試劑儲存在棕色瓶中),用去離子水稀釋至刻度,靜置反應15min。

(3)支鏈澱粉標準工作液分別移取1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5,4.0,4.5,5.0,5.5mL支鏈澱粉標準儲藏液於50mL容量瓶中,加lmL碘試劑,用去離子水稀釋至刻度,靜置反應15min。

3.樣品溶液的製備

銀杏果仁去硬殼和軟皮,搗碎烘幹,粉碎至60目,用無水乙醚脫脂10min,去除乙醚。精確稱取脫脂樣品0.1g,加入2mol/L的KOH溶液10mL,在75~80℃水浴中分散溶解10min,用濃稀HCl調節pH=3,用去離子水定容20mL,靜置;吸取1mL上清液於50mL容量瓶中,加1mL碘試劑,用去離子水稀釋至刻度,靜置15min。

4.測定

儀器采用日本島津MPS-2000型多用途分光光度計。以50倍去離子水稀釋的1mL碘試劑溶液作參比液。

(1)波長對的確定首先用濃度適中的直鏈澱粉標準工作液和支鏈澱粉標準工作液,在400~800nm上進行全波長掃描,得到各自的吸收曲線。直鏈澱粉和支鏈澱粉的最大吸收波長分別為568nm和512nm。按照等吸收點作圖法確定測量直鏈澱粉的波長對為568nm和420nm;測量支鏈澱粉的波長對為512nm和648nm。

(2)直鏈澱粉回歸方程在波長對568nm和420nm處測定直鏈澱粉標準工作液的吸光度值,以吸光度差值ΔA直對直鏈澱粉標準工作液的濃度進行一元線形回歸,得直鏈澱粉回歸方程。

(3)支鏈澱粉回歸方程在波長對512nm和648nm處測定支鏈澱粉標準工作液的吸光度值,以吸光度差值ΔA直對支鏈澱粉標準工作液的濃度進行一元線形回歸,得支鏈澱粉回歸方程。

(4)在波長對568nm和420nm及波長對512nm和648nm處分別測定樣品溶液的吸光度的值,並計算樣品溶液在兩波長對處吸光度的差值A樣,568-A樣,420,記為ΔA樣-直和A樣,512-A樣,648,記為ΔA樣-支。

5.計算

將ΔA樣-直代入直鏈澱粉回歸方程,可以求出樣品溶液中直鏈澱粉的濃度;將ΔA樣-支代入支鏈澱粉回歸方程,可以求出樣品溶液中支鏈澱粉的濃度。然後根據提取時稀釋的倍數關係,求出銀杏果仁中直鏈澱粉和支鏈澱粉的含量。