(三)雙波長分光光度計
在上麵介紹的單波長分光光度法測量中，是用兩個吸收池，其一裝參比溶液，在選定的波長下調其透光度為100%(即吸光度A=0)，然後再測量試樣溶液的吸光度。當試液中含有兩種吸收光譜互相重疊的成分時，用這種單波長分光光度計單獨測量待測成分的吸光度就很困難，必須進行萃取分離或加掩蔽劑等才能完成測定。另一方麵，由於必須使用兩個吸收池，吸收池的差異常會影響測量的精度，使測定更微量的成分受到了限製。雙波長分光光度計則克服了上述缺點。
從光源發出的光分成兩束，分別經過各自的單色器2、3後，得到波長為λ1和λ2的兩束單色光。借切光器調製，這兩束光以一定時間間隔交替照射裝有試樣溶液的吸收池。經檢測器的光電轉換和電子控製係統的工作，在數字電壓表上顯示出λ1和λ2的透光差值ΔT，或是顯示兩者的吸光度差值ΔA。
根據朗伯-比爾定律，試樣溶液在兩個波長λ1和λ2的吸光度的差值ΔA與溶液中待測物質的濃度成比例。雙波長分光光度法可將待測成分吸收光譜的任意波長設為零點，測定它與任意其他波長間的吸光度差值。
雙波長分光光度法具有下列優點：
(1)因為僅用一個樣品池進行測量，不需要用參比吸收池，故可消除參比池與樣品池的不同而引起的誤差，使分析精度提高數倍；
(2)對混濁樣品進行測定時，可消除不同混濁度所引起的背景吸收，即基線的變化幾乎完全被消除；
(3)適當選擇波長，可掩蔽共存組分的幹擾，因此可簡化混合組分同時測定的手續及數據處理，並可提高靈敏度和準確度；
(4)由於背景吸收及其他幹擾的消除，可測定微小光度，能檢測出0.01～0.005的消光度值；
(5)可應用於薄層色譜及紙上色譜的定量分析，測定時可消除薄層厚度不均勻所引起的誤差，使測量基線平穩。
但由於雙波長分光光度計光路結構和電學線路較為複雜，儀器價格比較昂貴，目前國內專用雙波長儀器並不普遍。應當指出采用單波長分光光度計進行雙波長分光光度法的定量分析也是可行的，隻是選擇的參比波長λ1和測定波長λ2要適當。
(四)多道分光光度計
多道分光光度計是在單光束分光光度計的基礎上，采用多道光子檢測器。多道分光光度計具有快速掃描的特點，整個光譜掃描時間不到1s。為追蹤化學反應過程及快速反應的研究提供了極為方便的手段，可以直接對經液相色譜柱和毛細管電泳柱分離的試樣進行定性和定量測定。但這類型儀器的分辨率隻有1～2nm，且價格較貴。