3.1.2 精密度試驗 取2.2.1項下製備的混合對照品儲備液2 μL,按2.2.3所述色譜條件連續重複進樣6次,測定峰麵積的積分值。結果五味子酯甲、五味子醇甲、五味子甲素、五味子酚、五味子乙素、安五脂素、五味子丙素的RSD分別為2.2%, 1.3%, 0.98%, 2.0%, 1.1%, 3.2%, 1.8 %,表明儀器精密度良好。
3.1.3 穩定性試驗 按2.2.2項下製備HNHY6樣品的供試品溶液,分別在0, 3, 6, 9, 12, 24 h按2.2.3所述色譜條件進樣。結果五味子酯甲、五味子醇甲、五味子甲素、五味子酚、五味子乙素、安五脂素、五味子丙素的RSD分別為1.8%, 0.93%, 0.30%, 0.55%, 0.81%, 2.4%, 1.1%,表明供試品溶液中上述5個成分在24 h內具有較好的穩定性。
3.1.4 重複性試驗 精密稱取6份HNHY6樣品,按2.2.2項下製備供試品溶液,按2.2.3所述色譜條件下進樣。結果五味子酯甲、五味子醇甲、五味子甲素、五味子酚、五味子乙素、安五脂素、五味子丙素的RSD分別為1.4%, 2.3%, 0.88%, 1.3%, 1.6%, 0.96%, 2.0%,表明本法重複性良好。
3.1.5 加樣回收率試驗 精密稱取6份HNHY6樣品,分別準確加入與樣品中五味子酯甲、五味子醇甲、五味子甲素、五味子酚、五味子乙素、安五脂素、五味子丙素質量相當的對照品溶液,按2.2.2項下製備供試品溶液,按2.2.3所述色譜條件下進樣,計算加樣回收率。結果五味子酯甲、五味子醇甲、五味子甲素、五味子酚、五味子乙素、安五脂素、五味子丙素的平均回收率(n=6)分別為100.4%, 98.61%, 99.89%, 102.1%, 99.67%, 97.58%, 100.6%,RSD分別為2.7%, 1.3%, 2.0%, 1.0%, 0.21%, 1.3%, 1.2%。
3.2 樣品測定結果
按2.2.2項下製備各樣品的供試品溶液,按2.2.3所述色譜條件下進樣。測定峰麵積,計算,樣品含量按幹燥品計算。
4 結果分析與討論
為解釋不同產地與南五味子各木脂素成分的相互關係,用SPSS 19.0統計軟件對樣品含量數據進行主成分分析,前2個主成分的特征值均大於1,說明前2個因子在反映產地與南五味子各木脂素成分的相互關係中起著主導作用,2個主成分的累積貢獻率達93.99%,能夠較客觀地反映產地不同與木脂素成分的內在聯係,故選取前2個主成分進行分析,各樣品的主成分得分圖五味子醇甲、五味子酚、五味子乙素和五味子丙素在PC1上有較高載荷,說明主要反映了五味子醇甲、五味子酚、五味子乙素和五味子丙素指標的信息;同理,PC2主要反映了五味子酯甲指標的信息。
相同產地的樣品都能很好的聚集在一起,說明相同產地不同批次間的樣品成分含量及種類無明顯差異。9個采集地的70個樣品根據主成份得分近似可分為3組。組1由漢中市南鄭縣樣品組成,組2由商洛市柞水縣、山陽縣的樣品組成,其餘樣品共同組成組,可看出組間差異較大。
對樣品含量數據進行ANOVA分析,發現組1和組2、組3的主要差異性成分為五味子酚,組1漢中市南鄭縣的樣品中五味子酚平均含量為8.53 mg·g-1,遠遠高於組2的652 μg·g-1和組3的106 μg·g-1。組2和組1、組3的主要差異性成分是五味子酯甲,組2商洛市的樣品中五味子酯甲含量平均為1.71 mg·g-1,而在組1、組3中平均含量僅為60.7,15.2 μg·g-1,遠遠低於組2。安五脂素是組3和組2、組1間的主要差異成分,其在組3中的含量平均為1.35 mg·g-1,約為其在組1中平均含量330 μg·g-1的4倍,在組2中平均含量590 μg·g-1的2倍。
組2的樣品采集地商洛市柞水縣、山陽縣位於秦嶺以南,秦嶺東側;組3的樣品采集地大多位於秦嶺西側。有文獻報道稱根據華中五味子果實中木脂素成分的變異, 結合其地理分布,可將產自秦嶺的華中五味子分為2種類型:產於秦嶺以南、秦嶺東側、中條山及太行山南端的華中五味子果實主要含有五味子酯甲;產於秦嶺西側陝西太白山、留壩、甘肅小隴山的華中五味子果實主要含有安五脂素[4]。本文的實驗結果與上述報道相一致。
在所測的70批樣品中,僅產自商洛市的20批樣品(SZYY1(10,SSBB1(10)符合藥典標準,安康市寧陝縣樣品中的五味子酯甲平均質量分數僅有43.3 μg·g-1,而安康市石泉縣樣品中的平均質量分數更低至0.95 μg·g-1,與黃梅芬報道的秦嶺南側安康地區不含降低血清中穀丙轉氨酶的有效成分五味子酯甲、乙、丙、丁相一致。
漢中市南鄭縣的樣品中含有大量的五味子酚尚未見報道,五味子酚是一種聯苯環辛烯型木脂素,存在於多種五味子科植物中。現代藥理實驗證明五味子酚具有抗凝纖溶、抗血小板聚集和擴血管活性, 對腦梗死及再灌注損傷在大腦功能和形態學方麵均具有治療保護作用, 是一個治療缺血性腦中風的潛在藥物[9]。南鄭縣的樣品可作為以五味子酚為主要藥效物質藥物的原藥材。
5 結語
總之,本研究采用高效準確的UPLC-TQ-MS技術,對不同產地的南五味子中的木脂素類成分進行了質量檢測分析,不同產地的木脂素類成分質量分數有明顯的差異。南五味子作為藥用植物,在用藥時,應根據不同藥用成分合理利用,才能更好的控製藥品的質量;才能更為科學合理的開發南五味子的藥用資源。
[參考文獻]
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[2] 孫成仁. 北五味子與華中五味子分布區訂正[J]. 中國中藥雜誌, 1993, 18(1): 10.
[3] 高建平. 五味子, 南五味子基源植物的比較研究[D]. 上海:複旦大學, 2003.
[4] 高建平, 王彥涵, 鬱韻秋, 等. 南五味子木脂素成分的HPLC含量測定及其變異規律[J]. 中國天然藥物, 2003, 1(2): 89.