不同產地南五味子中木脂素分析研究
化學
作者：楊潔 段金廒 李國龍 朱振華 朱太雷 錢大瑋 唐誌書
[摘要] 采用UPLC-TQ-MS技術對不同產地南五味子藥材中的7種木脂素類成分進行分析評價，為南五味子的科學藥用提供實驗依據。結果顯示秦嶺以南，東側的商洛市柞水縣、山陽縣所產南五味子中主要含五味子酯甲、五味子甲素；寶雞市眉縣，安康市石泉縣、寧陝縣，漢中市略陽縣所產的南五味子主要含有安五酯素，其中寧陝縣樣品中五味子甲素含量也較高；而位於秦巴山區腹地的漢中市南鄭縣所產的南五味子主要含五味子酚、五味子甲素。總之不同產地的南五味子所含木脂素種類和含量差別很大，在實際應用中應結合現代藥理實驗和臨床研究，根據所治療疾病相關的主要功效成分對不同產地南五味子藥材加以區別入藥，以達到藥物的最佳療效。
[關鍵詞] 南五味子；木脂素；LC-MS
[收稿日期] 2014-08-05
[基金項目] 國家自然科學基金麵上項目（81373978）；陝西省重點科技創新新團隊（2012KTC-20）
[通信作者] *唐誌書，博士，教授，主要從事中藥資源開發與綜合利用研究，E-mail
[作者簡介] 楊潔，碩士研究生，Tel：18691017877，E-mail
南五味子為木蘭科植物華中五味子Schisandra sphenanthera Rehd. et Wils 的幹燥成熟果實。始載於《神農本草經》，列為上品，具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心等功效[1]。南五味子廣泛分布於我國陝西、河南、安徽、湖北等地[2]。《唐本草》中記載有五味子“出蒲州及藍田山中”，宋《圖經本草》也記述，五味子“陝西州郡尤多”。秦嶺山脈自古就是南五味子一大主產區，主要分布在安康、漢中、西安、渭南、太白山、眉縣等地[3]。研究發現南五味子中含有大量的木脂素類成份，具有很好的降酶、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等作用[4]。如五味子酯類成分能顯著降低穀丙轉氨酶[5]，總木脂素部位具有鎮靜、催眠等多種藥理作用[6]。南五味子為中醫臨床常用的重要收澀藥，已有許多以南五味子為源藥材的藥物上市銷售，如護肝片、五酯滴丸、五味子糖漿等。其臨床應用十分廣泛，而保證原藥材的質量對臨床療效至關重要。已有學者研究產於秦嶺東西南北的南五味子木脂素種類、含量差別很大[7-8]，但其選點較少，所測成分單一，不能較為全麵的反映南五味子藥材的品質。基於此，本文對多產地多批次的南五味子藥材采用高效準確的UPLC-TQ-MS技術進行多成分分析，以期為南五味子藥材的合理利用提供科學依據。
1 材料
1.1 儀器
Waters ACQUITY UPLC係統（Waters公司，Milford，USA）；Xevo TQ檢測器（Waters公司）；MassLynx4.1質譜工作站軟件（Waters公司）；ML204/MS105型電子天平（梅特勒-托利多公司）；DHG9240型鼓風幹燥箱（杭州藍天化驗儀器廠）；EPED超純水係統（南京易普達易科技發展有限公司）；KQ250E型超聲波清洗器（昆山禾創超聲儀器有限公司）；Anke GL-16GII型離心機（上海安亭科學儀器廠）。
1.2 試藥與試劑
對照品五味子乙素（批號110765-200710）、五味子甲素（批號 110764-201111）、安五脂素（批號111844-201102）、五味子酯甲（批號111529-200604），五味子醇甲（批號 110857-201211）購自中國食品藥品檢定研究院；對照品五味子酚（69363-14-0）、五味子丙素（61301-33-5）購自成都曼思特生物科技有限公司。以上對照品經HPLC-PDA檢測純度均大於98%；甲酸（Merck，德國）和乙腈（Tedia，美國）均為色譜純，超純水（自製），其他試劑均為分析純。
2 方法
2.1 樣品的采集與加工方法
南五味子幹燥樣品收集自陝西9個地區，經南京中醫藥大學段金廒教授鑒定為木蘭科植物華中五味子的幹燥成熟果實。粉碎，過3號篩。
2.2 含量測定方法
2.2.1 對照品溶液的製備 精密稱取幹燥至恒重的對照品適量，加甲醇製成質量濃度分別為五味子甲素513 mg·L-1、五味子乙素203 mg·L-1、五味子酯甲103 mg·L-1、五味子酚126 mg·L-1、安五酯素387 mg·L-1、五味子丙素176 mg·L-1、五味子醇甲323 mg·L-1的對照品溶液。分別精密吸取上述各對照品溶液若幹配製成濃度分別為73.3，29.0，14.7，18.0，55.3，25.1，46.1 mg·L-1的混合對照品儲備液，4 ℃條件下貯藏備用。取混合對照品儲備液適量，采用逐級稀釋的方法，製成不同濃度的對照品應用液，各成分濃度係列，供考察線性範圍和含量測定用。
2.2.2 供試品溶液的製備 取各樣品粉末約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質量，超聲處理30 min，放冷，再稱定質量，用甲醇補足失重，搖勻，取1 mL稀釋至10 mL，經
2.2.3 色譜分析條件 色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流動相為0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫（0～4 min，70%B；4～4.5 min，70%～90%B；4.5～5 min，90%B；5～6 min，90%～70%B）；流速0.3 mL·min-1；柱溫35 ℃；進樣體積5 μL。
2.2.4 質譜檢測條件 離子化模式：ESI+；多反應監測（MRM）方式；毛細管電壓3.0 kV；離子源溫150 ℃；脫溶劑氣溫度550 ℃；脫溶劑氣流量1 000 L·h-1；錐孔氣流量50 L·h-1；碰撞氣流量0.15 mL·min-1；各化合物的保留時間、取樣錐孔電壓及碰撞能量。在上述色譜與質譜條件下所測各成分MRM 色譜圖。
3 結果
3.1 方法學研究
3.1.1 線性範圍 將2.2.1項下製備的不同濃度混合對照品應用液，按2.2.3所述色譜條件分別進樣2 μL，對照品濃度為橫坐標，以峰麵積的積分值為縱坐標，繪製標準曲線。