2.4.3 精密度試驗 取梔子苷對照品溶液置1.5 mL離心管中吹幹，加入小鼠空白血漿100 μL，使血漿中梔子苷質量濃度分別為0.28，2.21，20.06 mg·L-1。按2.3項下方法處理（n=5），結果梔子苷質量濃度分別為0.28，2.21，20.06 mg·L-1的血漿日內精密度的RSD分別為4.1%，0.33%，1.1%，日間精密度的RSD分別為2.0%，1.3%，0.38%。
2.4.4 回收率試驗 取梔子苷對照品溶液10 μL置1.5 mL離心管中吹幹，加入空白小鼠血漿100 μL，使血漿中梔子苷質量濃度分別為0.28，2.21，20.06 mg·L-1。按2.3項下方法處理，進樣分析，代入標準曲線計算測得的血漿含藥量，與理論值進行比較，計算方法回收率。另以蒸餾水替代空白血漿進行前述樣品的製備，進樣分析，將所得各濃度的血漿樣品峰麵積與蒸餾水樣品峰麵積進行比較，計算萃取回收率。低、中、高濃度的方法回收率分別為96.74%，98.30%，99.48%；萃取回收率分別為97.36%，92.75%，90.83%。
2.4.5 最低檢測限 在本實驗的色譜條件下，最低檢測限為25 μg·L-1（S/N≥3），達到梔子苷體內分析要求。
2.5 藥動學試驗
取雄性ICR小鼠80隻，體重18～20 g，隨機分為2組，分為醒腦靜微乳鼻腔給藥組（Ⅰ），共聚物修飾醒腦靜微乳鼻腔給藥組（Ⅱ），每組40隻，於實驗前12 h禁食，自由飲水。小鼠按4 μL/隻（即梔子苷4.04 mg·kg-1）給藥。鼻腔給藥時，以乙醚麻醉小鼠，固定頭部，用連接PE塑料軟管的微量注射器插入小鼠鼻腔內約0.2 cm，將定量藥物給入鼻腔，觀察是否有藥液從小鼠鼻腔流失。給藥後，分別於1，3，5，10，30，60，90，120 min取血，每個時間點各5隻小鼠。按2.3項下方法操作，按2.1項下方法測定，代入線性方程計算不同時間點梔子苷的血藥濃度。平均血藥濃度藥時曲線分別。梔子苷血藥濃度藥時數據用Kinetica藥動學軟件非房室模型擬合，主要藥動學參數。
3 討論
作為一種新型的高分子材料，聚乳酸（PLA）具有生物可降解性，當其進入體內後，代謝為乳酸，最終轉化為CO2和H2O，均是體內正常代謝產物[4]，具有可靠的生物安全性，因此已被美國FDA批準使用並廣泛應用於組織工程、藥物控釋係統等多個方麵[5]。聚乙二醇單甲醚（mPEG）是一種聚醚高分子材料，親水性佳，生物相容性良好，作為親水性鏈段，與疏水性鏈段PLA聚合而成的mPEG-PLA嵌段共聚物，具有獨特的可降解兩親結構，在藥物緩釋方麵有著巨大的發展潛力。本研究通過對用mPEG2000-PLA嵌段共聚物修飾的醒腦靜微乳中梔子苷藥動學的研究，擬探討mPEG2000-PLA共聚物對藥物體內特征的影響。
本實驗采用HPLC-UV測定醒腦靜微乳鼻腔給藥後血漿中梔子苷的量，結果梔子苷的保留時間約14.2 min，與小鼠空白血漿比較，給藥後小鼠血漿中的梔子苷能較好地分離，不受代謝產物及內源性物質的幹擾。在預實驗中，分別考察了內標法和外標法測定血樣中梔子苷含量，在對外標法進行方法學驗證後，發現其線性關係、日內精密度、日間精密度和回收率均符合要求，可滿足醒腦靜微乳給藥後梔子苷藥動學研究的要求，因此本實驗采用了更為簡便且易操作的外標法進行定量。
2種微乳經鼻腔給藥後，梔子苷均可迅速吸收入血，且代謝較快；與醒腦靜滴鼻液鼻腔給藥相比（tmax 3 min）[6]，體現了微乳與鼻腔有更強的親和性，可以迅速通過鼻黏膜進入血液[7]。與普通醒腦靜微乳相比，mPEG2000-PLA共聚物修飾醒腦靜微乳小鼠鼻腔給藥後Cmax和AUC顯著高於普通微乳組，梔子苷經鼻吸收入血程度更高，其原因可能為共聚物修飾微乳對鼻黏膜刺激較小，而能減少鼻腔黏液蛋白的分泌，從而避免其對藥物吸收的影響，因此更有利於藥物在鼻腔的吸收；也可能是微乳經mPEG2000-PLA修飾後與鼻黏膜的親和性更強，其作用機製有待於進一步研究。
[參考文獻]
[1] 王珊，杜守穎，陸洋，等. 醒腦靜微乳的體外釋放研究[J]. 中國中藥雜誌，2011，36（16）：2196.
[2] 趙雪姣，陸洋，杜守穎，等. 醒腦靜微乳對大鼠鼻黏膜刺激性研究[J]. 北京中醫藥大學學報，2012，35（9）：626.
[3] 趙雪姣. mPEG2000-PLA修飾醒腦靜微乳製備及評價研究[D].北京：北京中醫藥大學，2013.
[4] Salaam L E， Dean D， Bray T L. In vitro degradation behavior ofbiodegradable4-star micelles[J]. Polymer， 2006， 47（1）： 310.