小鼠經鼻腔給藥醒腦靜微乳和mPEG2000—PLA修飾醒腦靜微乳後體內梔子苷的動力學比較研究
藥代動力學
作者：溫然 陳曉蘭 李慧雲 郭青麗 陸洋 杜守穎
[摘要]該實驗建立了小鼠體內醒腦靜微乳和mPEG2000-PLA修飾醒腦靜微乳鼻腔給藥後測定血漿梔子苷濃度的高效液相色譜法，探討2種製劑經鼻腔給藥後梔子苷在小鼠體內的藥動學過程。將80隻小鼠分為2組，分別鼻腔給藥醒腦靜微乳和mPEG2000-PLA修飾醒腦靜微乳後，於不同時間點摘眼球取血，HPLC測定血漿中梔子苷的量，以Kinetica軟件非房室模型擬合藥動學參數。結果顯示小鼠鼻腔給藥醒腦靜微乳後，血藥主要藥動學參數為Cmax（4.36±2.69）mg·L-1，tmax1 min，MRT（29.73±4.54）min，AUC（53.63±14.03） mg·L-1·min；小鼠鼻腔給藥共聚物修飾醒腦靜微乳後，血藥主要藥動學參數為Cmax（9.75±4.14）mg·L-1，tmax 1 min，MRT（22.34±2.90）min，AUC（131.87±40.13）mg·L-1·min。與醒腦靜微乳相比，共聚物修飾醒腦靜微乳經小鼠鼻腔給藥後，梔子苷入血程度更高，可能與其刺激性較小而吸收較多有關。
[關鍵詞]醒腦靜微乳； mPEG2000-PLA； 梔子苷； 鼻腔給藥； 藥動學
醒腦靜主要由麝香、鬱金、梔子、艾片組成，具開竅醒腦、涼血活血、清熱解毒之功效，為臨床救急必備用藥之一。醒腦靜處方中既有脂溶性成分也有水溶性成分，而微乳作為一種熱力學穩定的油水混合體係，可同時溶解水溶性和脂溶性2部分成分，因此本實驗室前期將醒腦靜製備成微乳製劑[1]。考慮到微乳中藥物及表麵活性劑對鼻黏膜有一定的刺激性[2]，實驗室前期以聚乙醇單甲醚2000-聚乳酸（mPEG2000-PLA）嵌段共聚物替代部分表麵活性劑修飾醒腦靜微乳製備了共聚物修飾醒腦靜微乳，通過考察兩者對鼻黏膜刺激性發現長期給藥共聚物修飾微乳可表現出降低對鼻黏膜刺激性的作用[3]。為了進一步研究2種微乳的藥動學差異，為醒腦靜製劑合理用藥提供藥動學實驗依據，本實驗研究了2種醒腦靜微乳中梔子苷在小鼠體內的藥動學過程。
1 材料
LC-20AT高效液相色譜儀（日本島津公司）；Sartorius BS 110S型電子分析天平（北京賽多利斯科學儀器有限公司）；G16型醫用高速離心機（白洋離心機廠）；MX-S渦旋儀（北京大龍興創實驗儀器有限公司，Dragon Lab）；IKA勻漿機（德國）。
梔子苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110749-201115）；醒腦靜微乳、mPEG2000-PLA修飾醒腦靜微乳（實驗室自製，梔子苷質量分數均為20.2 g·L-1）；乙腈、甲醇（美國Fisher公司，色譜純）；純淨水（杭州娃哈哈集團）；其餘試劑均為分析純。
ICR小鼠，雄性，18～20 g（北京維通利華實驗動物技術有限公司），合格證編號SCXK（京）2012-0001）。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
DiamonsilTM鑽石C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相乙腈-水（14∶86）；檢測波長238 nm；流速1.0 mL·min-1；柱溫室溫。
2.2 對照品溶液的製備
精密稱取梔子苷對照品10.03 mg，置10 mL量瓶中，乙腈溶解並稀釋至刻度，得質量濃度為1.003 g·L-1儲備液。
2.3 樣品采集與處理方法
摘眼球取血後肝素抗凝，離心分離血漿備用。吸取小鼠血漿100 μL，加入乙腈300 μL沉澱血漿蛋白，漩渦混合器振蕩60 s，10 000 r·min-1高速離心10 min，吸取上清液360 μL，60 ℃水浴，空氣吹幹，加入甲醇100 μL振蕩30 s，10 000 r·min-1高速離心10 min，取上清液20 μL進樣。
2.4 方法學考察
2.4.1 專屬性試驗 樣品按2.3項下方法處理，按2.1項下色譜條件測定。結果梔子苷的保留時間為14.2 min。小鼠空白血漿的內源性物質對梔子苷的測定均無幹擾。
2.4.2 線性關係考察 取對照品儲備液，用乙腈分別稀釋成質量濃度為2.76，5.52，11.03，22.07，55.17，110.33，160.48，200.6 mg·L-1的梔子苷溶液，各取10 μL加入空白1.5 mL離心管中，吹幹，加入小鼠空白血漿100 μL，渦旋混合30 s，按2.3項下處理，進樣分析。以梔子苷質量濃度C（mg·L-1）為橫坐標，以梔子苷峰麵積A為縱坐標，進行線性回歸，得到回歸方程為A=15 217C+851.82，r=0.999 9，血漿中梔子苷質量濃度在0.28～20.06 mg·L-1，峰麵積與血漿藥物濃度呈良好的線性關係。