1.造模方法
Wistar大鼠,雌雄兼用,乙醚麻醉後,右後肢膝關節外側剪毛,用6號針頭經膝關節穿刺進入大鼠脛骨近端骨髓腔1/3處,分別注入5%魚肝油酸鈉0.05ml及6×109cfu/ml金黃色葡萄球菌懸液0.05ml,取出針頭,大鼠放回籠中。造模後3周,以軟X射線機拍大鼠右後肢脛骨片,將形成炎症病變、造模成功的大鼠隨機分為3組,分別給予皮下注射利福平混懸液、蛇葡萄根膏塗敷大鼠右後肢、不含藥的軟膏基質塗敷大鼠右後肢。
2.觀察方法
觀察骨髓腔細菌數。
3.研究結果
三組動物於給藥4周後全部處死,無菌條件下取下右後腿脛骨,磨碎後接種於培養液中,37℃培養,得到菌檢結果,結果。
二、血源性感染法
(一)複製機製
骨髓炎感染最常見的致病菌為金黃色葡萄球菌,感染細菌從體內其他感染灶,如癤癰、膿腫、扁桃體炎等經血行到達骨組織,在身體抵抗力差的情況下發生骨髓炎,即血源性骨髓炎。通過股靜脈注入金黃色葡萄球菌引起骨骼有創傷部位的感染,形成骨髓炎模型。
(二)複製方法
動物用大白鼠,麻醉後膝關節周圍剃毛,消毒鋪置無菌手術單,於脛骨前緣切開皮膚、皮下及深筋膜,顯露脛骨上端前內側,用1~2mm鑽頭鑽孔,髓腔內注入5%魚肝油酸鈉50μl,縫合皮膚,再手術顯露對側股靜脈並從股靜脈注入5×108/ml金黃色葡萄球菌1mL。待鼠清醒後放回籠中,給予自由飲水及飼料。術後觀察體溫及局部的體征變化,通常3周後局部可見軟組織腫脹,少數形成竇道,竇道口肉芽組織增生,可見骨瘺管、骨膜增厚黏連。
本模型能良好地模擬人類血源性骨髓炎的病理過程,且易於複製及控製,可靠程度高。所用細菌毒力的強弱及靜脈注射細菌的數量是本模型成敗的關鍵,因此,在造模前,菌種必須先注入活體動物內繁殖1~2代以增加細菌毒力。另外,注射細菌數量要掌握適當,過大會致動物死亡,過小影響骨病灶形成。實驗發現濃度為5×108/ml的菌液1ml為最佳用量。
(三)研究實例
例4魏玉玲等為了探討骨炎Ⅰ號治療急性骨髓炎的作用機製,按上法成功地造成動物脛骨骨髓炎模型,灌胃給予藥物。通過觀察體溫、WBC、C3b受體花環率及紅細胞免疫複合物花環率、血清溶酶體含量、組織學檢查及抑菌試驗。結果顯示骨炎Ⅰ號有明顯的抗炎、抑菌及提高機體免疫力的作用。
1.造模方法
除正常組外,其餘3組大白鼠用20%烏拉坦(1g/kg)腹腔注射麻醉,膝關節周圍剪毛,無菌下顯露脛骨近端內側,用1~2mm鑽頭鑽洞,髓腔內注入5%魚肝油酸鈉50μl,縫合皮膚;手術顯露對側股靜脈並從股靜脈注入5×108/ml金黃色葡萄球菌液1ml。待鼠醒後放回籠中,給予自由飲水及飼料。以上4組,正常組及模型組不給藥,青黴素組及中藥組給藥量按鼠與人體表麵積折算,為人體體重劑量的3.5倍,青黴素肌肉注射。骨炎Ⅰ號3ml/d給予灌胃,給藥組均於造模後第3天給藥,療程結束後(造模後21天)4組動物一律處死檢查。
2.觀察方法
(1)體溫檢查:4組動物於造模前及造模後3、7、14、21天隨機各取8隻用電子測溫儀各測肛溫1次。
(2)血WBC檢查:4組動物於造模後3天及用藥後18天分別隨機各取8隻剪尾取血作WBC計數。
(3)免疫指標:4組動物於3周隨機各取8隻從心髒取血,作C3b受體花環率及紅細胞免疫複合物花環率檢測。血清溶菌酶含量按平皿法進行檢測。
(4)病理組織學觀察。
3.研究結果
(1)肉眼觀察:模型組所有動物於3周後局部見軟組織腫脹,少數形成竇道,竇道口肉芽組織增生,可見骨瘺管,骨膜增厚黏連。
(2)各組動物治療前後WBC變化:。
第四節 膝關節骨關節病模型
膝關節骨關節病是一種常見病,尤多見於40歲以上的中老年患者,主要臨床表現為關節疼痛、僵硬、功能障礙。主要病理改變為膝關節及其周圍軟組織的蛻變,關節軟骨麵變性、斷裂甚至脫落,軟骨下骨質增生、硬化,關節邊緣骨刺形成,繼發滑膜和關節炎性充血、肥厚、增生。
一、關節手術複製法
(一)複製機製
通過手術切除穩定關節的韌帶結構,使關節不穩定,形成關節軟骨變性。
(二)複製方法
1.兔膝關節病模型複製方法
采用成年家兔,常規備皮消毒、麻醉。通過膝正中旁切口暴露膝關節,切斷前交叉韌帶、內側副韌帶和內側半月板,然後縫合關節囊和皮膚。
術後2個月X線片可見關節間隙狹窄,4個月關節骨端有明顯的骨質炎性變,脛
骨平台邊緣骨贅形成。光鏡下2個月的關節軟骨表層變薄,4個月可見軟骨細胞壞死等改變。
2.小鼠膝關節病模型複製方法
采用體重40g左右的小白鼠,備皮消毒後,沿髕韌帶內側切口暴露膝關節,切斷後肢內側副韌帶及膝前內側筋膜擴張部,並修剪斷端處,造成約2mm缺損,導致雙後外翻畸形。關閉切口。術後第2天讓造模小鼠於拖箱內每天起共行走30m。術後2周鼠關節軟骨變薄伴裂紋,4周時軟骨顯著變薄,破損嚴重,裂隙達鈣化區,部分可見軟骨下骨質暴露等病理改變。
3.雙下肢大白鼠模型複製方法
將出生1周的鼠的雙前肢的尾部切除,在3~6個月內觀察膝及髖關節,約有60%動物發生膝及髖關節骨關節病。
(三)研究實例
例1沈霖等采用手術法複製了兔膝關節病模型並進行了相關指標測定。
1.造模方法健康家兔,雄雌兼用,體重2.5~3.0kg,動物常規消毒,硫噴妥鈉腹腔內麻醉,通過正中旁切口進入右膝關節,探查關節內無原發病損後,切斷前交叉韌帶與內側副韌帶,完整切除內側半月板,然後對合關節囊,皮膚用6/0號創傷尼龍線縫合。手術後,動物一籠一兔單獨飼養,並每天定時兩次強迫動物手術側肢體活動。
2.觀察方法所有動物在術後2月、4月均行x攝片。並於術後2、4月分別處死動物。在無菌條件下切開右膝關節,取關節液計量檢查,肉眼觀察關節內病理改變,取脛骨平台內側關節麵的軟骨及骨組織,常規切片,
HE染色,在光學顯微鏡下觀察病理學變化。
3.研究結果
(1)關節液檢查結果:術後2、4月動物關節液細菌培養均陰性。其中術後4月手術側關節液量增多,呈淡黃或棕黃色改變,黏滯度增高,白細胞計數增加,與正常側比較有顯著性差異。
(2)關節軟骨各項觀察結果:X線片下,術後2月除見關節間隙較健側狹窄外,未見其他病變;術後4月見關節骨端有明顯的骨質囊性變,部分軟骨象牙質變及增厚,脛骨平台內側邊緣可見骨贅形成。肉眼觀察健側關節軟骨麵光滑,呈乳白色。術後2月肉眼未見軟骨明顯病變;術後4月手術側見部分軟骨麵變為淺黃色,有散在蟲蝕樣破壞小點,部分有動物脛骨平台軟骨麵被增生的纖維組織覆蓋。光學顯微鏡下,見健側關節軟骨可清楚地分為表層、移行層、輻射層及軟骨基質鈣化層。在輻射層和鈣化層之間可見波浪形潮標。術後2月,術側常見為關節軟骨表層變薄,少量軟骨細胞固縮,術後4月,術側軟骨表層部分軟骨細胞死亡,膠原纖維暴露,形成纖顫,並有典形裂縫形成,裂縫深入至骨基質,裂縫中心可見纖維結締組織浸潤。另有部分區域出現軟骨細胞增殖現象,且多量血管侵入軟骨細胞區,血管周圍見類骨質形成。上述所見,與臨床骨關節病的病理變化基本相符。