二、關節固定法
(一)複製機製
關節製動造成骨關節退化,其機製是直接的機械壓迫和由此產生的營養障礙,以及關節的廢用導致關節軟骨的膠原合成減少和膠原的破壞、斷裂,從而破壞了軟骨的彈性纖維結構。
(二)複製方法
動物用大白兔,將家兔右後肢的膝關節用石膏管型固定於伸直位,6周即可造模成功。
(三)研究方法實例
例2方蘇亭等為了觀察鬆凝分筋手法治療膝骨關節病的療效,將兔膝關節於伸直位石膏固定6周製作骨關節病模型。結果顯示藥物對照組和空白對照組模兔患膝活動度明顯受限,關節液異常,滑膜增生,鏡下顯示關節軟骨細胞萎縮,數量減少,核濃縮,軟骨基質鈣化障礙;手法治療組模兔患膝活動度明顯增大,功能良好,關節液性狀與健側無明顯區別,滑膜無明顯增生,鏡下顯示軟骨膜、軟骨細胞清晰,排列正常,軟骨骨化規則。
1.造模方法將兔膝關節於伸直位石膏固定6周。
2.觀察方法所有模型動物在6周後測量右膝關節活動度;拍攝X線片;全部處死,在無菌條件下切開右膝,肉眼觀察關節內病理改變;取股骨髁、脛骨髁關節軟骨及軟骨下骨組織、滑膜組織病理切片,在光學顯微鏡下觀察病理變化。
3.研究結果造模動物的觀察結果如下:
(1)所有兔右膝伸直位僵硬,活動度均在5°以下。
(2)X線片:僅少數膝關節的間隙較健側略狹窄,其餘未見明顯異常。
(3)關節液:無色、黏稠、量少不足0.1ml。
(4)滑膜及關節軟骨肉眼:關節軟骨略黃,無光澤,不透明,變薄,變粗糙,缺乏彈性。膝內側間隔蛻變明顯,股骨內髁關節軟骨麵有”潰瘍“,脛骨內髁關節軟骨有皺褶。滑膜變黃、肥厚、變韌。鏡下:關節軟骨變薄,軟骨細胞萎縮,數量減少,核濃縮或消失,排列紊亂,關節邊緣部軟骨細胞輕度增生,軟骨膜纖維性增生,軟骨基質鈣化區變薄,骨化障礙。軟骨下骨未見明顯改變,關節滑膜絨毛略肥大,纖維組織呈玻璃樣變。
三、靜脈結紮加固定法
(一)複製機製
結紮一側股靜脈和臀下靜脈可造成靜脈淤滯,產生骨內高壓,出現早期膝關節骨關節病病變,但關節軟骨蛻變輕微。而家兔膝關節伸直位固定35天就可造成膝關節骨關節病模型。因此用兩種方法疊加造模,其造模成功率高,術後6周即可以觀察到家兔膝關節明顯蛻變、軟骨表層明顯缺失、關節軟骨潰瘍、軟骨細胞紊亂和軟骨細胞丟失,纖維化及少量骨贅形成等,符合膝關節骨關節病的病理改變。
(二)複製方法
選擇新西蘭純種大白兔(中老年),麻醉後將兔仰臥固定於手術台上,雙髖關節外展稍屈曲,雙膝關節屈曲30°,於一側腹股溝處作1cm縱切口,分離出股靜脈,緊靠腹股溝韌帶處作雙重結紮,再於同側臀部髖關節後外側做小切口,分離出髂內靜脈的屬支臀下靜脈,行雙重結紮,縫合皮下各層和皮膚。術後立即以矯形繃帶打管形石膏固定術側膝於伸直位6周。此造模方法能保證膝旁骨內高壓和關節軟骨蛻變的陽性率。
(三)研究方法實例
例3王羽豐等為了觀察補腎活血中藥對膝退行性膝關節病的治療作用,將45隻新西蘭純種大白兔,通過結紮左股靜脈和臀下靜脈及將結紮肢伸直位固定造成膝退行性膝關節病模型。
1.造模方法
按上法左下肢造模,右下肢於相同部位僅切開皮膚,暴露出靜脈,不結紮,再縫合行假性對照。術後立即以矯形繃帶打管形石膏固定左膝於伸直位,所有兔子單籠飼養,於籠中自由活動。
2.觀察方法
先行肉眼觀察關節病變,然後處死行病檢切片光鏡觀察。
3.研究結果
造模動物觀察顯示術後4周左膝關節有少許炎性變,關節液透明稍淺黃,滑膜稍腫、輕度充血,半月板正常,軟骨表麵有輕微表層缺損,基本未見到明顯潰瘍麵和軟骨下骨裸露,於脛股骨髁外側和中央可見十分小的骨贅,可染蛋白多糖染色比對照組蒼白,軟骨細胞稍減少。術後6周關節液呈淺黃色稍混濁,滑膜腫脹,較明顯充血,軟骨表麵中等表層缺損,可見到多個小骨贅和潰瘍麵及輕度軟骨下骨裸露,氨基多糖染色中度缺失,軟骨細胞中度減少。8周後,病理變化較6周均有不同程度加重,可見關節液混濁,滑膜明顯腫脹、充血肥厚,明顯表層缺損和較大的潰瘍麵及軟骨下骨裸露,偶見到半月板有缺損和假性囊腫。
四、幹骺端髓內血運阻斷法
(一)複製機製
軟骨下骨的狀況對軟骨退行性變有重要的影響,在軟骨下骨造成缺血可以產生軟骨的退行性變,軟骨下骨的動脈、靜脈的紊亂將會導致關節透明軟骨的退行性變。而膝關節股骨端的血供主要來源於髓內血供、幹骺端血管、骺端血管,其中髓內血供是主要的營養支。阻斷髓內血供,使股骨幹骺端處於不完全缺血狀態,可形成軟骨的蛻變。
(二)複製方法
成年大白兔,麻醉後於一側股骨下端外側切開皮膚、皮下組織,於關節外分開肌肉,顯露股骨下端,以骨鑽將股骨幹骺端鑽一直徑0.5cm的骨圓窗,將該處髓質刮除,直達對側骨皮質,以骨蠟填塞,阻斷股骨幹骺端的髓內血運,縫合傷口,一般在16周時關節軟骨出現顯著的退行性變。
(三)研究方法實例
例4劉蜀彬等用股骨幹骺端髓內血運阻斷法誘發兔膝關節骨性關節炎的動物模型,結果顯示在術後8周時,關節軟骨無顯著性改變。一般在16周時關節軟骨出現顯著的退行性變。提示:髓腔內血供阻斷可誘發鄰近軟骨蛻變。
1.造模方法
按上法造模。
2.觀察方法
造模動物在術後8周、16周取材,將取出的股骨髁行常規固定,脫鈣,包埋,HE染色。依Mankin法中的結構、細胞以及潮線的完整性進行OA評分;取部分軟骨進行透射電鏡觀察。
3.研究結果
(1)組織學結果:在術後8周時,實驗組表麵光滑,潮線完整,僅有個別出現軟骨細胞增生,與對照側無顯著性差異。術後16周實驗組的主要異常表現有:①軟骨表麵粗糙、淺表潰瘍、表層裂隙,部分出現少許鈣化層裂隙,但軟骨基質內無明顯纖維化;②所有的標本均出現細胞數目的變化,大部分是細胞散在增生和巢狀增生,少量出現減少;③部分出現潮線不清晰和中斷;④在骨蠟填入部位,可見囊腔,囊壁為纖維組織,有大量吞噬骨蠟後的巨噬細胞,在周圍骨髓組織內可見多核異物巨細胞。
(2)透射電鏡所見:實驗組的軟骨細胞形態不規則,細胞漿內細胞器顯示不清,軟骨基質內有明顯的鈣鹽沉積,顯示軟骨基質內鈣化,基質內纖維絲排列紊亂顯示不清。
(孫玉明沈霖)