第一節 急性軟組織損傷模型
急性軟組織損傷是指由於突然暴力所引起的軟組織損傷,屬於祖國醫學急性傷筋的範疇,祖國醫學認為暴力傷及機體後,局部筋脈受損,氣血不暢。現代醫學認為,外力作用於機體,一方麵可直接造成局部組織細胞變性壞死,毛細血管破裂、出血以及血管壁通透性增加;另一方麵由於局部血液循環係統的破壞、創傷性無菌性炎症反應和局部水腫等原因,使局部內環境改變、組織細胞缺氧、代謝紊亂,導致組織細胞進一步變性壞死,加重局部組織損害。
(一)複製機製
通過暴力打擊、撞擊或擠壓造成造模動物的軟組織損傷。損傷會導致皮下組織和肌肉組織的擠壓壞死,組織缺氧,使無氧代謝增加,乳酸堆積,pH值下降。
(二)複製方法
用大鼠或兔作為模型動物,以後肢作為打擊部位,實驗前一天用8%硫化鈉脫毛,實驗時動物固定,以恒定的力量打擊動物相同的部位,造成局部軟組織損傷。打擊的方法可以用自由落體方法,利用一定質量的重物,從一定的高度作自由落體落下打擊造模動物,造成動物局部肌肉組織的損傷。也可以用衝擊方法,利用可控製的彈性力打擊造模動物,造成動物局部肌肉組織的損傷。
(三)研究方法實例
例1沈霖等采用自由落體法製備軟組織損傷兔模型,並進行了肉眼、光鏡病理學及電鏡超微結構的動態觀察。
1.造模方法
用普通級新西蘭兔40隻,體重2.5~3.0kg,雌雄兼用。選擇右後肢大腿外側肌肉豐滿處,用12g砝碼從0.8m高處墜落,造成局部軟組織損傷,打擊後表皮未見破損,無骨折。
2.觀察方法
分別於造模後1小時、1天、3天、5天及10天,在模兔無麻醉狀態下,從血腫中心部位剖開,肉眼觀察軟組織損傷和修複情況。然後在剖開處取損傷組織,按常規製成病理切片,HE染色,置光學顯微鏡下觀察10個高倍視野內皮內出血、肌纖維變性與斷裂、炎性滲出及組織修複狀況。另取損傷組織進行透射電鏡超微結構觀察。
3.研究結果
造模後1小時,肉眼觀察表皮來見破損,皮下及淺肌層可見9.28±1.43cm2出血灶;光鏡下見皮下組織與真皮分離,肌纖維灶性斷裂,大量紅細胞滲出。電鏡下見損傷肌細胞局部有大量血塊,肌膜嚴重破壞,膠原纖維崩解,周邊肌纖維肌絲斷裂或分離。
造模後1天,見皮下組織廣泛黏連,筋膜可見淤斑,淺層肌肉有淤血灶,色暗紅;肌細胞間質中大量紅細胞淤積,肌束間距增寬,周圍微血管擴張、充血,血漿蛋白滲出。
造模後3天,仍見皮下組織黏連及淺肌層淤血灶,且血腫周圍肌肉色淡,彈性較差;肌纖維混濁腫脹、扭曲,肌絲收縮不一致:肌纖維及肌膜斷端明顯,無接近趨勢。大量紅細胞及中性粒細胞浸潤。
造模後5天,肌肉淤斑,部分肌纖維呈玻璃樣,均勻染成紅色,排列紊亂;白細胞呈彌漫性浸潤。
造模後10天,肌肉色澤淡紅,肌纖維斷端無愈合,其間見多量肌蕾及成纖維細胞。紅細胞及白細胞浸潤現象減少。肌絲仍紊亂,崩解組織及血塊尚未完全吸收,未見糖原及線粒體。
例2朱利敏等采用自由落體法製備軟組織損傷兔模型,並進行肉眼觀察、病理學檢查和肌組織pH值測定。結果顯示,該模型的軟組織炎症反應與人軟組織損傷臨床表現相吻合。
1.造模方法
用普通級新西蘭兔20隻,5月齡,體重2.5~3.0kg,雌雄兼用,隨機分為模型組和正常對照組。實驗前一天用8%Na2S溶液脫毛劑除去後腿被毛。實驗時固定動物,在左右後肢大腿外側做好標記,模型組用10g砝碼從1m高處墜落,造成標記處局部軟組織損傷,打擊點麵積為1cm2,打擊後無骨折,無皮膚破裂。
2.觀察方法
(1)眼觀察:觀察動物有無皮下淤斑和腫脹,觸診皮下結節大小,記錄其消失時間。
(2)病理學檢查和肌組織pH值測定:重錘擊傷後3、7、13、20天分別處死動物,取左後肢擊傷處中心部位肌組織1cm×1cm×0.5cm,於10%甲醛中固定後,作常規石蠟切片,HE染色,鏡檢肌組織淤血、壞死、水腫和結締組織增生等變化。另取右後肢擊傷處中心部位肌組織0.5g,加pH值為7.0的重蒸餾水至1.7ml,勻漿後測pH。
(四)研究結果
(1)肉眼觀察:模型組重錘擊傷後7天仍見擊傷處腫脹,皮下淤斑全部存在,局部肌肉觸診可及皮下結節。
(2)病理學變化:模型組重錘打擊後3天,皮下組織黏連,淺層肌肉有出血現象,周圍肌肉蒼白,彈性差。光鏡下見肌肉中廣泛出血,肌纖維混濁腫脹,部分肌膜破裂,部分肌纖維壞死,其周圍水腫。打擊後7天,皮膚與皮下組織仍有黏連和少量出血,肌肉有少量瘀血。光鏡下見肌纖維玻璃樣變、肌間質水腫,伴大量粒細胞浸潤。打擊後13天,光鏡下仍見肌組織間質水腫、肌纖維玻璃樣變,結締組織增生。打擊後20天,偶見肌纖維玻璃樣變、結締組織增生。
(3)肌組織pH值變化:軟組織損傷越嚴重,肌組織pH值越低。重錘打擊後3、7天肌組織pH值與正常對照組相比有顯著性差異,結果見表11-1。
例3張愛平等為了研究納米相陶瓷遠紅外線對急性軟組織損傷動物模型的治療作用,用自由落體打擊法進行造模,重點觀察組織學上的病理表現,結果表明動物模型是成功的。
1.造模方法選用昆明種小白鼠,體重25~30g,雌雄兼用,采用自製軟組織損傷打擊器,打擊錘砝碼50g,小鼠左側臀部剃毛,側臥式固定於軟組織打擊器平台上,將打擊錘拉至5cm高度鬆開,自由落下,連續打擊5下,每隻動物隻打擊1隻腿。分為自然愈合對照組和生物陶瓷遠紅外線治療組。
2.觀察方法治療組在造模後1天開始治療,兩組分別於造模後2天、4天、6天,分3批取材。常規石蠟包埋,HE染色,磷鎢酸蘇木精染色,醛複紅橙黃G法染色。光鏡檢查:①創傷局部皮下組織、肌肉組織和創傷性無菌性炎症反應等病理表現;②創傷病灶中肥大細胞分類、計數及脫顆粒率評定。
3.研究結果
(1)HE染色結果:對照組造模後2天,局部皮下組織水腫明顯,中性粒細胞浸潤密度較高,也有一些單核細胞滲出,骨骼肌纖維腫脹明顯;造模4天,水腫減輕,中性粒細胞減少,單核細胞增多,纖維結締組織增生較為明顯;造模6天,皮下組織水腫基本消失,創傷部位骨骼肌組織內腫脹減輕,纖維組織增生較明顯。從病理片顯示肥大細胞邊界不規則,顆粒外溢明顯。
(2)肥大細胞染色結果:肥大細胞分成A、B兩型:A型為靜止型肥大細胞,細胞呈圓形或梭形,細胞邊界整齊光滑,胞質顆粒均勻無脫落。B型為脫顆粒型,細胞形態不完整,邊緣有缺口,甚至模糊不清,脫顆粒現象明顯。2組小白鼠肥大細胞脫顆粒率比較,。
例4朱換平等為了觀察踝舒對急性軟組織損傷動物模型IL-1B的影響。用自由落體打擊方法建立家兔急性軟組織損傷模型,分別應用踝舒及對照藥正骨水塗布患處,並於治療後第24小時、72小時取材並勻漿,采用放免法測量勻漿液IL-1B含量。結果顯示家兔急性軟組織損傷後受傷局部IL-1B含量升高。此實驗中運用硬塑料管對準造模部位,讓鐵錘在硬塑料管內自由落下,保證了打擊部位的準確性。