正文 第十章 骨傷科免疫學檢測基本實驗技術(十七)(1 / 3)

(三)神經組織研究方麵

中樞神經、周圍神經的修複和再生一直是神經科學界的難點和熱點。近30年來隨著基礎醫學研究的進展,神經的修複,特別是周圍神經損傷的修複方法已由單一的顯微外科方法發展到現在的激光技術、細胞移植技術、組織工程技術、基因工程技術等,極大地豐富和發展了神經損傷修複的研究。在神經係統的具體研究手段方麵,免疫組織化學技術應用得較為廣泛,效果也較為理想,現將與骨傷科疾病關係較為密切的神經係統免疫組織化學研究舉例如下:

骨傷科臨床經常可以見到一些以腹股溝疼痛為主訴而經多種檢查可除外髖部及股骨頭器質性病變的”非特異性腰腿痛“病人。臨床發現對下位腰間盤突出症(L4~L5、L5~S1)表現為腹股溝痛患者,當針對腰間盤進行治療(如手術摘除變性的間盤組織)後,腹股溝痛消失或明顯緩解,提示下位腰間盤與上位腰神經前支(L1、L2)之間存在著解剖聯係。鑒於此,姚猛等以Wistar大鼠為實驗對象,分別於L5~L6椎間盤右後側壁,注入辣根過氧化物酶(HRP),48小時後取雙側L1、L2脊神經節製片,觀察脊神經節內HRP標記細胞及切除腰椎盤交感幹對HRP標記細胞數的影響。切片應用HRP與免疫細胞化學PAP法(過氧化物酶-抗過氧化物酶複合物)相結合的方法顯色,確定HRP標記細胞的性質,對下位腰間盤與上位腰神經之間的神經傳導通路進行了追蹤,以探討間盤源性腹股溝痛的發生機製。結果顯示:各組大鼠雙側L1~2脊神經節中均發現HRP標記細胞。HRP標記細胞數組間對照(保留交感幹側為22.5±7.1~29.3±9.7,切斷交感幹組為12.9±5.1~13.3±4.9,P<0.01)和自身對照(保留交感幹側為24.8±6.7、30.6±8.4,切斷交感幹側為15.8±4.4、14.5±4.1,P<0.01)結果均表明,當切斷腰椎旁交感幹後,脊神經節內HRP標記細胞數明顯減少。免疫細胞化學實驗觀察到雙側L1、L2脊神經節內有HPR和SP雙標細胞。提示:間盤源性腹股溝痛主要由交感神經傳遞,累及L1與L2神經前支節段性支配區的牽涉痛。

近年來,對外周神經的損傷尤其是坐骨神經的損傷機製以及神經的生長修複研究較多,而且在研究方法上多采用免疫組織化學技術,取得了一定進展,值得同道借鑒,具體實例如下:

膠質細胞源性神經營養因子(GDNF)能促進多巴胺神經元的存活和修複,在中樞神經係統以及運動、感覺、交感神經元中均有表達。為進一步了解和探討GDNF在正常及受損神經中的表達及其作用,張文捷等采用免疫組化技術觀察大鼠正常坐骨神經及其條件性損傷後背根節細胞不同時期GDNF表達的變化規律,以探討GDNF對損傷神經元的作用。具體方法為:45隻成年雌性Wistar大鼠隨機分為3組:A組(N=5)正常對照組,B組(N=20)坐骨神經壓榨傷組,C組(N=20)坐骨神經切斷/結紮組;B、C兩組按存活期不同再各分為4個亞組,每組5例。大鼠分別於傷後3天、2周、1個月、2個月處死,取材L5節段損傷側背根節及損傷坐骨神經的遠近節段,SP法行GDNF(兔多抗)免疫組化染色,圖像分析處理,觀測GDNF表達。結果顯示:①正常背根節細胞GDNF表達主要分布於小神經元,少數為大神經元。②坐骨神經損傷促使同側背根節神經元GDNF表達顯著增強,傷後2周達到高峰;B組背根節細胞GDNF表達在傷後1個月時輕度下調,傷後2個月恢複為對照組水平。C組背根節細胞GDNF表達保持高水平,並至觀察後期2個月。③坐骨神經損傷同時誘導背根節衛星細胞及坐骨神經施萬細胞GDNF表達顯著增強,其中遠端坐骨神經GDNF表達強於近端。B組這些細胞的陽性表達持續至傷後2周,C組傷後1個月時其表達仍顯著。提示:GDNF是參與損傷初級感覺神經元反應的重要因子,並可能對正常及受損背根節細胞發揮營養作用。

Tropic 1808基因重組蛋白能特異誘導背根節軸突定向生長,為了進一步觀察Tropic 1808基因表達蛋白在受損大鼠坐骨神經中的表達與分布,陳雪等用酶聯間接法和雙重免疫熒光法進行免疫組織化學染色,並通過計算機圖像處理技術,對健康成年SD大鼠正常坐骨神經以及切斷12天後坐骨神經遠側端、近側端的Tropic 1808基因表達蛋白進行研究,測量其陽性區域的強度與麵積。結果顯示:損傷神經的近側端和遠側端中施萬細胞均有Tropic 1808基因表達蛋白的陽性免疫反應,陽性免疫反應物主要分布於施萬細胞膜上,遠側端的陽性反應物強度和麵積強於和大於近側端。認為周圍神經損傷後,Tropic 1808基因表達蛋白分布於損傷近側端和遠側端的施萬細胞膜上,並且遠側端中該蛋白的表達強於近側端。