正文 第十一章 常見骨傷科動物模型的複製及研究方法實例(一)(2 / 3)

1.造模方法

動物用健康青紫蘭兔,雄性,50隻,體重2.0~2.5kg,剪刀剪去兔子右大腿根部內側毛,再塗以8%Na2S溶液脫毛劑,隨機分為空白組、模型組、正骨水組、高劑量踝舒組、低劑量踝舒組5個組。除空白組外,將其餘4組兔子造模。使兔子側臥於兔盒中,右側在下,並將其固定,將一長20cm、直徑3.2cm內壁光滑的硬塑料管下口對準剪去毛的部位,使其垂直,將一重250g、直徑3.0cm的打擊鐵錘置於塑料管上口,穩定後讓鐵錘自由落下,打在兔子大腿內側根部肌肉豐厚處,連續打擊2次,可見受打擊部位皮膚有細小出血點。造模後30分鍾開始給藥。

2.觀察方法

造模後24小時、72小時分兩批處死兔子,用手術刀切開兔子受打擊部位皮膚,分離皮下組織,剪取受打擊部位中心呈青紫色肌肉組織,用生理鹽水漂洗1分鍾,以濾紙吸幹水,用扭力天平稱取80~100mg組織,按10mg/0.5ml比例加入生理鹽水,緩慢而均勻地研磨15分鍾,至勻漿液呈均勻一致懸濁液,倒入試管中,以2500r/min轉速離心15分鍾,收集上清液,置-20℃冰箱中備用。用放免法測定勻漿液IL-1B含量。

3.研究結果

模型組受傷局部IL-1B含量在受傷後72小時之內持續升高,踝舒能使受傷局部IL-1B含量降低。

例5PGE2作為一種炎症介質,在炎症反應的產生和加重方麵起重要作用。邱桐等對家兔急性軟組織損傷模型,分別應用踝舒及對照藥正骨水塗布患處治療,在治療後第24、72小時取材並勻漿,采用放免法測量勻漿液前列腺素E2(PGE2)含量。結果顯示家兔急性軟組織損傷後受傷局部PGE2含量升高。

1.觀察方法

於造模後24、72小時分兩批處死兔子,用手術刀切開兔子受打擊部位皮膚,分離皮下組織,剪取受打擊部位的中心呈青紫色的肌肉組織,用生理鹽水漂洗1分鍾,用濾紙吸幹,用扭力天平稱取80~100mg,每10mg組織加入生理鹽水0.5ml,於勻漿器中緩慢而均勻地研磨15分鍾,至勻漿液呈均勻一致懸濁液,倒入試管中,2500r/m離心15分鍾,收集上清液,置-20℃冰箱中備用。用放免法測定勻漿液PGE2含量。

2.研究結果

模型組受傷局部PGE2含量在受傷後72小時之內持續升高,踝舒能使受傷局部PGE2含量降低。

例6軟組織損傷後代謝紊亂,組織細胞缺氧,而局部的PO2可直接反映局部的代謝狀況。張果忠等研究了搽劑1號對軟組織損傷局部組織PO2的影響。

1.造模方法

SD大鼠,體重180~220g,均為雄性,先用10%硫化鈉溶液於雙後大腿部脫毛,24小時後兩次脫毛,之後選擇雙大腿外側中點處作為打擊點,做好標記,以5%戊巴比妥鈉行腹腔麻醉,將大鼠固定於木板上,確定打擊部位,以自製打擊器打擊3次,造成局部軟組織損傷,造模時導致皮損或骨折者排除。打擊器由打擊物支架和固定線等組成,打擊物的頭部直徑為2.5cm,重110g,打擊高度80cm。

2.觀察方法

造模後,動物隨機分為模型組、正紅花油組、搽劑1號組,依上述方法造模,隨選3、7天為觀察期,每組共觀察10條腿。檢測時,首先將動物麻醉、待測部位常規消毒,於被打擊中心點旁約0.8cm,將電極向打擊中心部位刺入,使針尖位於打擊中心即可。將PO2檢測儀按要求進行調試,將電極聯通PO2檢測儀,即可在體動態檢測。取電極穩定後5分鍾時的值為記錄值。每次檢測前後均對電極的可靠性進行驗證。

3.研究結果

通過實驗發現,用藥組局部PO2得到了明顯改善,說明搽劑1號通過其活血等作用,使局部的代謝狀況得到了較快的恢複。

例7挫傷會使纖維蛋白原含量增高,血細胞電泳時間延長,使得血漿黏度和全血黏度增加。馮芳軍等為了研究消瘀止痛膏對急性軟組織損傷的治療機製,采用彈力打擊法建立大白鼠急性軟組織挫傷的動物模型,造模後以損傷症侯指數、血漿黏度、組織學及形態計量學分析等作為觀察指標進行實驗觀察,特別是對血漿黏度進行了觀察。

1.造模方法

大白鼠適用性喂養1周後,先用10%硫化鈉溶液脫除大鼠小腿部鼠毛,用自製撞擊器打擊,以彈簧為動力,撞擊接觸麵直徑0.8cm,撞擊衝量為2kg?m/s在小腿中部外側連續打擊3次,造成局部軟組織挫傷。

2.觀察方法

造模成功後將模鼠隨機分為消瘀止痛膏組、紅花油組、模型對照組,同等條件下喂養。模型對照組不作處理,紅花油組與中藥組分別外敷紅花油與消瘀止痛膏,共治療7天。

血漿黏度觀察三組動物分別於造模後即刻、1、2、3、5、7天各組取3隻大鼠作血漿黏度檢查。用1%戊巴比妥鈉溶液按4mg/100g體重的劑量腹腔注射,將大鼠麻醉,並固定於手術板上,打開腹腔分離腹主動脈,動脈下方結紮,上方用動脈夾夾住。將矽化後的5ml注射器準確吸取肝素溶液0.1ml,使溶液充分與注射器接觸,小心排盡氣泡。將針頭插入腹主動脈,打開動脈上方的動脈夾,慢慢抽出至2ml處。將抽出的血液注入堿化過的離心管內。以3000r/m的速度離心15分鍾,離心以後取出上層血漿0.8ml注入測試儀機內測試。

第二節 長骨幹骨折動物模型

由於力的作用破壞了骨的完整性或連續性稱骨折。骨折的愈合在組織學上分為3個階段,即血腫機化期、原始骨痂形成期和骨痂改造塑形期,骨折修複直至愈合是一個複雜的組織變化過程,包括細胞的增殖、分化以及細胞外基質的合成等,可根據不同的實驗目的,在術後不同的時間取材,檢測骨痂的生成過程及細胞的演化規律。

一、開放性橈骨骨折模型

(一)複製機製

通過手術方法造成動物橈骨骨缺損。

(二)複製方法

選用健康成年家兔或SD大鼠,雌雄不限,麻醉後,對前臂脫毛、消毒,無菌操作下取前臂背外側切口,逐層切開,顯露橈骨。在橈骨中下1/3交界處或旋前圓肌止點遠側,用手術刀片切除0.3cm寬的骨膜,顯露骨膜下骨質,再用電鋸橫行鋸斷橈骨,造成0.1~0.3cm寬的骨缺損,衝洗後逐層關閉切口。

由於兔前肢上下尺橈關節先天性骨性融合,離斷橈骨後尺骨可起到內部支撐的作用,故不需內外固定。本法缺損區形成骨痂的方式為膜內化骨,可避免完全骨折造成骨折處骨痂成分複雜的情況,因此本模型便於膜內化骨的觀察和研究。