（2）H2O2：用去離子水新配製成1μmol/L。
（3）半胱氨酸溶液：0.05mol/L pH7.4PBS配製成5mmol/L。
（4）其餘同上述”氯胺T法“。
【操作方法】
（1）取50μl 0.1mol/L，pH7.4PBS，加入有蓋反應瓶。
（2）加入20μl Na125I溶液，混勻。
（3）加入待標記的蛋白質或多肽5μl。
（4）加入乳過氧化物酶溶液5μl。
（5）加入10μl H2O2溶液，混勻，室溫下反應10分鍾。
（6）再次加入10μl H2O2溶液，混勻，室溫下反應10分鍾。
（7）加入半胱氨酸溶液500μl，終止反應。
（8）加入2%的KI溶液，稀釋殘留的碘化物。
（9）其餘步驟同上述”氯胺T法“。
【質量鑒定】
與上述Ch-T方法相同。
2.核苷和核苷酸的標記
基因工程已廣泛應用於醫學診斷，新的分子、物種和品係重組。32P-核苷酸類是基因工程研究中不可缺少的核素標記的化合物。製備這類標記化合物的方法有公學合成法、化學酶促合成法和酶促合成法等。其中酶促合成法最常用，其優點是需要設備少，操作簡便，時間短，易防護，標記物的放射性比活度高，能夠滿足基因工程中進行DNA標記分子雜交等工作要求。
［γ-32P］-ATP標記：在酶促反應中，甘油酸-3-磷酸激酶在Mg2+存在下，利用ATP首先將甘油酸-3-磷酸磷酸化，形成甘油酸-1，3二磷酸和ADP，然後在甘油醛-3-磷酸脫氫酶催化下，以還原型輔酶I為遞氫體，使甘油酸-1，3二磷酸還原並且解磷酸化，形成甘油醛-3-磷酸和無機磷，加入放射性32P，進一步與ADP結合形成γ-32P-ADP。
【材料及試劑】
（1）H323PO4溶液：用1mol/L NaOH將pH調至7.0，備用。
（2）反應液：在10ml0.05mol/L，pH8.0Tris-HCl緩衝液中，含6mmol/L MgCl2，2mmol/L L-半胱氨酸，0.33mmol/L Na2SO4，0.33mmol/L 5′ATP-Na，0.1mmol/L輔酶Ⅰ和0.33mmol/L甘油醛-3-磷酸鈉鹽（將甘油醛-3-磷酸鋇鹽用HCl少許溶解後與Na2SO4溶液混合，離心取上清液）。
（3）甘油酸-3-磷酸激酶和甘油醛-3-磷酸脫氫酶（需預處理去除保存液中的硫酸銨：將200μl甘油酸-3-磷酸激酶和60μl甘油醛-3-磷酸脫氫酶，置於含2mmol/L穀胱甘肽和0.1mmol/L輔酶Ⅰ的0.01mol/L，pH8.0Tris-HCl緩衝液中，透析過夜，更換透析液3次）。
【操作方法】
（1）在反應管中加入適量反應液、酶液和H332PO4溶液（370MBq），總體積約2ml，混勻後，置37℃溫育30分鍾。
（2）將反應液過DEAE-Sephadex A-25柱（DEAE-Sephadex A-25為陰離子交換柱分離純化品，［γ-32P］-ATP的回收率可達90%，洗脫液較溫和，pH適中，對產品無損傷）。柱先用0.15mol/L NH4HCO3液洗，然後用0.5mol/L NH4HCO3液洗脫，流速1ml/分鍾，分瓶收集洗脫液7～8ml，每瓶1ml。
（3）在洗脫液中，加入一定量的三乙胺和95%乙醇溶液，真空低溫冷凍幹燥後，再加入95%乙醇兩次，將NH4HCO3去除；
（4）取少量乙醇溶液溶解，用活度計測定比活度；
（5）再用乙醇水溶液溶解成37MBq/ml，分裝冷凍保存；
【質量鑒定】
與上述Ch-T方法相同。
2.［α-32P］-dATP標記以［γ-32P］-ATP作為前體，以3′-dATP作為底物，經過四個連續的酶促反應過程，產生了［α-32P］-dATP。
反應式如下：［α-32P］-dATP+3′-dATP多核苷酸激酶［5′-32P］3′-dADP+ADP
［5′-32P］3′-dADP核酸酶P1［5′-32P］dAMP+P1
［5′-32P］-dAMP肌激酶、丙酮酸激酶［α-32P］dATP
【材料及試劑】
（1）高比活度［γ-32P］ATP（185×103GBq/mmol），多核苷酸激酶（1U/ml），核酸酶P1（320U/mg），肌激酶（1800U/mg），丙酮酸激酶（515U/mg，3.6mg/ml），己糖激酶（300U/mg），3′-dAMP，二硫蘇糖醇；烯醇式丙酮酸，三甲基氨甲烷，DEAE-Sephadex A-25，纖維素。
（2）Tris-HCl反應混合液：50m Tris-HCl中含10mmol/L MgCl2，20mmol/L KCl，5mM二硫蘇糖醇，4mmol/L烯醇式丙酮酸，200μg/ml肌激酶和600μg/ml丙酮酸激酶混合液。
（3）其他材料同［γ-32P］-ATP標記技術。
【操作方法】
（1）首先製備［γ-32P］-ATP，待標記完成後，將反應瓶放在60℃水浴中純化5分鍾，然後依次加入2～3mmol/L 3′-dAMP，12U多核苷酸激酶，室溫反應3～10小時，用1mol/L醋酸調pH至4.5～6，再加入6U核酸酶P1，室溫反應10分鍾，然後用1mmol/L NaOH調反應液pH至8，加入60mmol/L（約4μl）葡萄糖和1U（約3μl）己糖激酶，室溫反應40分鍾。
（2）反應液上DEAE-Sephadex A-25柱，先用0.125mol/L NH4HCO3洗脫［α-32P］Datp產品，加入三乙胺和95%乙醇，真空冷凍幹燥，產品用50%乙醇溶解。反應混合液也可采用高壓液相色譜進行分離。產品純度和分離效果優於柱層析法。
【質量鑒定】
與上述Ch-T方法相同。
二、免疫放射測定
1968年Miles和Hales建立了利用核素標記的抗體檢測抗原的放射分析法，為了與放射免疫分析區別，故稱免疫放射分析技術（immunoradiometric assay，IRMA）。由於它應用核素標記抗體作為示蹤劑，在反應體係中加入過量的抗體，待測抗原（或標準品）與核素標記的抗體進行全量反應，故亦稱非競爭性免疫分析法。IRMA與RIA相比較有以下特點：①IRMA反應係統中應用的標記物為免疫球蛋白。易於提純和進行碘化標記，標記抗體的比活度較高，有利於提高分析的靈敏度，且不同抗體的標記基本相同；而在RIA中應用的標記物是抗原。抗原種類繁多，化學結構各異，較難獲得純品，標記方法亦多種多樣；②在IRMA反應係統中使用過量的標記抗體，直接與抗原結合，不存在競爭結合的複雜反應，因此反應速度較快，即使使用親和力較低的單克隆抗體，也能滿足實驗要求；而在RIA中抗體是微量的，所以一定要用高親和力的多克隆抗體；③IRMA使用的標記抗體和固相抗原在反應中都是過量的，隻有待測樣品加樣誤差才會影響分析結果，因此IRMA的批內和批間變（CV%）比較小；而RIA使用的抗體和標記抗原在反應中是固定量的，加樣誤差可嚴重影響測定結果。