（一）基本原理
將核素標記在抗體上以過量的標記抗體直接與待測未知抗原結合，未結合的遊離標記抗體通過和固相的抗原免疫吸附劑結合而去除，測定其複合物的放射性計數；如待測抗原含量多，複合物計數率就高，反之則待測抗原量少。
和RIA三種主要反應試劑參加的競爭性結合反應比較，IRMA方法是一種非競爭性結合反應，主要反應試劑隻有過量標記抗體（Ab*）和待測抗原（Ag）二種，反應達到平衡比較快，所測得的抗原抗體複合物（Ag-Ab*）的放射性計數與待測抗原的濃度成正相關；由於使用過量抗體，其靈敏度比RIA法提高10～100倍以上。這些都是IRMA方法的優越之處。
（二）實驗方法
根據檢測過程的操作步驟不同，有以下幾種類型：
直接IRMA法：將待測抗原與過量的標記抗體進行溫育，使二者結合，然後加入固相抗原免疫吸附劑再次溫育，吸附遊離的標記抗體。離心去除沉澱物，測定上清液中放射性強度，根據校正曲線即可得知待測樣品中抗原的含量。
雙抗體夾心IRMA法：在待測抗原內依次加入固相抗體和標記抗體，反應後形成固相抗體（Ab1）-抗原-標記抗體（Ab2）複合物，洗滌去除遊離的標記抗體，測定固相抗體或載體上免疫複合物的放射性強度，根據校正曲線即可得知待測樣品中抗原的含量。此法僅用於檢測有多個決定簇的多肽和蛋白質抗原。
間接IPMA法：此法是在上述雙抗體夾心法的基礎上，進一步改良為用核素標記抗Ab2的抗體（羊抗兔或抗鼠的IgG），反應後形成固相抗體（Ab1）-抗原-Ab2-*Ab3（標記抗抗體）的四重免疫複合物。其中，Ab3可作為通用試劑，可省去標記針對不同抗原的特異性抗體。
BSA-IPMA法：是將生物素-親和素係統（BSA）引入免疫放射分析，建立的新一代IRMA。此法最大的優點是使用生物素化抗體和以核素標記親和素為示蹤劑，可以通用於甾體類、前列腺素等小分子物質的檢測。由於1個抗體分子上可標記數十個生物素分子，而每個親合素又可與4個生物素分子結合，從而產生多級放大效應。同時生物素與親合素之間的親和力要比抗原抗體間的親和力大10萬～100萬倍，二者結合極為穩定，因此，使其靈敏度、特異性和精密度都大大提高。目前一些超靈敏度的IRMA分析試劑盒就是應用上述原理製成的。
【材料及試劑】
（1）標記抗體。
（2）固定抗原吸附劑。
（3）標準抗原。
（4）待測樣本。
（5）γ計數儀和低溫離心機。
【操作步驟】
以固相雙抗體法測定血清中促甲狀腺素（TSH）為實例。
（3）用B%為縱坐標，不同濃度的TSH標準品為橫坐標繪製校正曲線，然後根據檢測管的B%，從校正曲線中即可查得相應的TSH含量。
三、放射受體分析（RRA）
受體是存在於細胞表麵、細胞質或細胞核內的生物活性物質，其功能和細胞外的信息分子（配體）特異性結合，將信息轉變為生物效應。受體現已可從細胞組織中分離、提取，進行定量和定位分析。放射受體分析（radioreceptor assay，RRA）或受體的放射配體結合分析（radioligand binding assay，RBA）是建立在放射性標記配體與受體之間的結合反應，它是目前對受體分子進行定量和定位分析研究的靈敏、可靠的一項技術。在藥物設計、作用機製、生物效應及疾病的病因探討、診斷和治療等方麵的應用已有較大發展。
（一）基本原理
放射受體分析的原理與免疫放射測定相似。應用放射性核素標配體，在一定條件下與相應的受體結合成配體-受體複合物。放射受體分析可用於測定受體的親和常數、解離常數、受體結合數以及定位分析。
（二）實驗方法
以人外周血白細胞糖皮質激素受體放射配體結合分析作為實例進行介紹。
【試劑及材料】
（1）［1，2，43H］-地塞米鬆（3H-Dex）：試驗時稀釋成10μl/ml。
（2）3%葡聚糖（dextran T 500）溶液。
（3）紅細胞溶解緩衝液：0.155mol/L NH4Cl，10mmol/L KH2PO4，10mmol/L K2HOP4，1mmol/L EDTA，pH7.2。
（4）均相閃爍液：PPO 7.0g，POPOP 0.4g，萘75g，乙二醇甲醚350ml，二甲苯加至1000ml。或 PPO 3.0g，POPO 0.4g，萘110g，二氧六環1000ml。
（5）pH7.2 Hanks液和pH7.2，10mmol/L PBS。
【操作步驟】
（1）分離白細胞：取靜脈血7～8ml，肝素抗凝。用3%葡聚糖T500溶液促進紅細胞凝聚沉降，吸取富含白細胞的血漿層。離心後，再用溶紅細胞緩衝液將殘存的紅細胞溶解去除。白細胞存活率應大於95%，紅細胞殘存率應小於0.01%。用Hanks液配製成5×106個/ml。
（2）如欲去除內源性氫化可的鬆，可將白細胞懸液預先於35℃放置15分鍾，待內源性皮質醇-受體複合物解離。用Hanks液洗滌後再將白細胞重懸浮。
（3）取1ml 5×106個/ml白細胞懸液，加一定濃度3H-Dex。作Scatchard標圖法時，於2～20nmol/L L3H-Dex之間作6～7個濃度；作一點結合分析時，用接近飽和度的3H-Dex 10nmol/L。
（4）21℃保溫3小時，加3ml冷的pH7.2，10mmol/L PBS終止反應。於4℃，300r/min離心5分鍾，吸棄上清液。
（5）用漩渦振蕩器將細胞沉澱團混勻，用冷的pH7.2，10mmo/L PBS洗滌兩次，去除遊離的甾體。
（6）於細胞沉澱物內加98%甲酸0.1ml，置60～70℃作用30～60分鍾，將細胞消化。加入8ml均相閃爍液，用閃爍計數器計算cpm值。
（7）用外道比法校正，所得cpm為總結合值。
（8）用加相同濃度3H-Dex和加2000倍醋酸地塞米鬆的平行管的cpm為非特異性結合值。總結合cpm減去非特異性cpm即為特異性cpm。結果以特異性結合fmol/細胞數或位點/細胞表示。
（林燕萍）
第七節 免疫組織化學技術在骨傷科實驗中的應用
免疫細胞化學技術不僅具有免疫學的特異性，而且還兼備了顯微鏡檢查的準確性，所以在醫學領域被廣泛應用。除了在醫學基礎研究中起重要作用外，也在臨床診斷上顯示出巨大的實用價值，如在腫瘤、各種傳染病及自身免疫性疾病等方麵。骨傷科的科研和臨床同樣需要這門新技術的滲透和幫助。目前，免疫細胞化學技術正朝定量和分子水平發展。