（5）在一個塑料盒或塑料袋中洗滌濾膜，不斷搖動：依次加入250ml 2×SSC／1％SDS和1×SSC／0.5％SDS，分別在室溫下洗15分鍾，再加依次加入250ml 0.2×SSC／0.1％SDS和0.1×SSC／0.1％SDS，分別於68℃洗30分鍾。洗滌後，用手提式監測器測定濾膜的放射性。
4.雜交結果的檢測
（1）室溫下將濾膜在0.1×SSC中漂洗片刻，然後將其放在一疊紙巾上，除去液體後再將其放在一張塑料薄膜上，用以放射性墨水製作的黏性圓點標簽在塑料膜上標幾個不對稱的點，以便以後校準放射自顯影片與濾膜的位置。
（2）用另一張塑料薄膜蓋住濾膜，將濾膜裝入帶有增感屏的曝光暗盒內。在暗室內，將一張X線底片放入曝光暗盒，使之接觸濾膜。將暗盒置-70℃冰箱，使濾膜對X線底片曝光1～7天。
（3）將暗盒從冰箱中取出，置室溫1～2小時，然後衝洗X線片。
三、Northern印跡法
（一）原理
Northern印跡是指將RNA變性及電泳分離後，將其轉移到固相支持物上的過程，從而用於雜交反應以鑒定其中待定mRNA分子的大小與含量。基本原理與
Southern印跡相同，但Northern印跡雜交技術也有如下特點：①Northern印跡雜交技術檢測的是RNA，可特異性的對mRNA進行定性、定量分析，並確定其分子量大小。因RNA極易被環境中存在的RNA酶破壞，因此，在提取RNA時一定要除盡RNA酶。②RNA電泳一定要在變性凝膠中進行，在凝膠中加入乙二醛、甲醛等變性劑，防止RNA分子二級結構的形成，維持其在凝膠中的線性狀態。③電泳結束後，凝膠不需要進行變性的中和，直接進行凝膠中RNA的轉膜，即Northern印跡。
（二）主要儀器、材料和試劑
1.主要儀器和材料手提式紫外燈、手提式監測器、電泳儀、電泳槽、照相設備、熱封口器、水浴箱、真空烤箱、Eppendorf管若幹、Tip頭若幹、搪瓷盤、鑷子、剪刀、塑料手套、解剖刀、新華2號濾紙、衛生紙、玻璃板、硝酸纖維素濾膜（0.45μm）、塑料袋、塑料薄膜、X光底片、增感屏、曝光暗盒。
從哺乳類細胞提取的總RNA、32P-DNA探針
2.試劑1mg／ml溴化乙錠（用重蒸水從10mg／ml貯存液稀釋、20×SSC、10×SSC、6×SSC、2×SSC，1％SDS、1×SSC，0.5％SDS、0.2×SSC，0.1％SDS瓊脂糖、5×甲醛凝膠、電泳緩衝液、甲醛、加樣緩衝液（用於RNA凝膠電泳）、甲酰胺、50×Denhardt's試劑、20×SSPE、50％葡聚糖硫酸酯、300mg／ml肝素、10mg／ml鮭精DNA。
（三）操作步驟
1.RNA電泳
（1）將瓊脂糖在微波爐或沸水浴中溶解，然後將溶液冷卻至50～60℃。然後再將瓊脂糖溶液加入到1×甲醛凝膠電泳緩衝液（pH6.9～7.0）中，至終濃度1％。將37％甲醛溶液（12.33mol／L）加入到凝膠溶液中，至終濃度0.32mol／L，倒入已用膠帶封住邊緣的製膠盤中，放好梳子，凝膠凝固1小時後即可使用。
（2）在Eppendorf管中，將RNA樣品（用高壓滅菌水適當稀釋）與等體積的加樣緩衝液混合，總體積約為加樣孔體積的80％。再將混合後的樣品置沸水浴2～4分鍾，然後置冰上冷卻2分鍾，使RNA變性，離心5秒鍾（12000r／min）。
（3）每管加入1.2μl 1mg／ml溴化乙錠。將樣品加入凝膠的點樣孔內。凝膠於1×甲醛凝膠電泳緩衝液內，以5V／cm的電壓在室溫進行電泳，直到溴酚藍移動約8cm。
2.轉膜（毛細管轉移法）
（1）電泳完畢後，將一透明尺放在凝膠旁，在紫外燈下拍照。在凝膠左上角切去一角（加樣孔一端為上）。將一張濾紙放在一疊玻璃板上，形成一個長和寬均大於凝膠的支撐平台，將其放入搪瓷盤內。倒入20×SSC溶液。當平台上方的濾紙濕透後，用玻璃棒趕出所有氣泡。
（2）取一張硝酸纖維素濾膜，剪去一角，使之與凝膠上的切角相對應。將濾膜浮在高壓滅菌水表麵，直至濾膜從下向上濕透，隨後將濾膜在10×SSC中浸泡至少5分鍾。
（3）將凝膠翻轉倒置在平台上，用玻璃棒趕出所有氣泡。用塑料薄膜圍繞凝膠周邊。將濕潤的硝酸纖維素濾膜放置在凝膠上（注意應使兩者的切角相重疊。濾膜的一條邊緣應剛好超過凝膠上部的加樣孔邊緣。濾膜置於凝膠表麵後就不應移動），用玻璃棒趕出所有氣泡。
（4）將兩張與凝膠一樣大小的濾紙在20×SSC溶液中浸濕，將其放在濕潤的硝酸纖維素濾膜上，用玻璃棒趕出所有氣泡。將一疊略小於濾紙的紙巾放在濾紙之上，並在紙巾上放一塊玻璃板，然後用一個500g的重物壓實，使RNA轉移過夜。
（5）轉移完畢後，除去凝膠上的紙巾和濾紙，翻轉凝膠和硝酸纖維素濾膜，將凝膠在上置於一張幹的濾紙上。用軟芯鉛筆或圓珠筆在濾膜上標記凝膠加樣孔的位置。將凝膠從硝酸纖維素濾膜上剝除。將濾膜在6×SSC溶液中漂洗後放在紙巾上，室溫下幹燥30分鍾。
（6）濾膜晾幹後置於兩張濾紙中間，放在80℃真空烤箱中幹烤2小時即可用於雜交。
3.Northern雜交
（1）配製預雜交液：每平方厘米硝酸纖維素濾膜大約需要0.15ml預雜交液（預雜交液：6.5％葡聚糖硫酸酯、1％十二烷基肌穀氨酸鈉、50％甲酰胺、5×Denhardt's試劑、5×SSPE、500μg／ml肝素、鮭精DNA在變性後加入）。
（2）將預雜交液先預熱至42℃後加入塑料袋，將表麵帶有目的RNA的硝酸纖維素濾膜放入稍寬於濾膜的塑料袋，用5×SSPE將濾膜浸濕5分鍾。將鮭精DNA置沸水浴10分鍾，然後置冰上冷卻1～2分鍾，使DNA充分變性。
（3）將5×SSPE從塑料袋中除去後加入預雜交液，按每平方厘米濾膜加20μl鮭精DNA，至終濃度200μg／ml。應盡可能除淨袋中的空氣。用熱封口器封住袋口，將其置42℃水浴保溫4小時。
（4）將標記的DNA探針置沸水浴10分鍾，置冰上冷卻2分鍾，使DNA充分變性後，將變性探針直接加入袋中。應盡可能除淨袋中空氣，封住袋口。將封好的雜交袋再封入另一個未汙染的塑料袋，置42℃水浴保溫過夜。