（5）在一個塑料袋或塑料盒中洗滌濾膜：
第一次洗：加500ml 2×SSC／1％SDS，52～55℃洗30分鍾。
第二次洗：加500ml 2×SSC／0.5％SDS，52～55℃洗30分鍾。
第三次洗：加500ml 0.2×SSC／0.1％SDS，52～55℃洗30分鍾。
用手提式監測器檢查濾膜，如果放射性太強，洗第四次：加500ml 0.2×SSC／0.1％SDS，於65℃洗30分鍾。
4.雜交結果的檢測
（1）洗滌完畢後，在0.1×SSC中漂洗一下濾膜，將其放在紙巾上，除去液體。將濕潤的濾膜放在一張塑料薄膜上，用以放射性墨水做的黏性圓點標簽在塑料膜上標幾個不對稱的點，用於以後校準放射自顯影片與濾膜的位置。
（2）用另一張塑料薄膜蓋住濾膜，將濾膜裝入帶有增感屏的曝光暗盒內。在暗室內，將一張X線底片放入曝光暗盒，使之接觸濾膜。將暗盒置-70℃冰箱，使濾膜對X線底片曝光1～7天。
（3）從冰箱中取出暗盒，置室溫1～2小時，待其溫度上升至室溫後衝洗X線底片。
四、斑點雜交和狹線印跡
（一）原理
將RNA或DNA變性後直接點樣於硝酸纖維素膜上，用於基因組中特定基因及其表達的定性及定量研究，稱為斑點或狹縫印跡（dot and slot blot），也是實驗室中常用的技術之一。與Southern及Northern印跡法相比，其優點是簡單、迅速；可在同一張膜上同時進行多個樣品的檢測；對於核酸粗提樣品的檢測效果也較好。其缺點是不能鑒定所測基因的分子質量，而且特異性不高。有一定比例的假陽性。
近年來，此技術已有了進一步的發展。現已設計出一種多孔過濾加樣器，許多核酸樣品可以同時加樣並以固定的帶型聚集於硝酸纖維素濾膜上，而這種帶型便於用密度掃描儀進行定量檢測，多孔過濾加樣器由Lucite有機玻璃板構成，上麵有許多錐形孔（斑點印跡）或狹槽（狹線印跡）用於加樣。加樣器與抽吸板相配，帶有一張硝酸纖維素膜用於聚積樣品。上述裝置已有商品出售。
（二）主要儀器、材料和試劑
1.主要儀器和材料塑料手套、硝酸纖維素濾膜、塑料袋、塑料薄膜、X線底片、增感屏、曝光暗盒、多孔過濾加樣器、熱封口器、水浴箱、手提式監測器、真空烤箱、水抽吸泵、Eppendorf管、Tip頭、微量加樣器（0～20μl，0～200μl，200～1000μl各1支）、鑷子、剪刀。
從哺乳類細胞分離的總RNA、32P-DNA探針。
2.試劑甲酰胺、甲醛、50×Denhardt's試劑、20×SSPE、50％葡聚糖硫酸酯、30％十二烷基穀氨酸鈉、300mg／ml肝素、鮭精DNA 10mg／ml、20×SSC、10×SSC、2×SSC／1％SDS、1×SSC／0.5％SDS、0.2×SSC／0.1％SDS。
（三）操作步驟
1.斑點雜交
（1）將一張硝酸纖維素濾膜（孔徑0.45μm）在水中浸泡片刻使之濕潤，再用20×SSC於室溫浸泡1小時。與此同時，用0.1mol／L氫氧化鈉溶液仔細清洗多孔過濾加樣器，並用滅菌水衝洗幹淨。
（2）將密封墊支撐板放在該裝置的抽真空板上，再將橡膠密封墊放在支撐板上。將浸濕的硝酸纖維素濾膜放在密封墊上，再將該裝置的上層部分（帶有許多錐形加樣孔）放在濾膜上。擰緊螺絲，使多孔過濾加樣器的上下兩部分夾緊。然後將抽真空板與抽真空管道相連接。
（3）將所有孔內灌滿10×SSC，用較小的負壓輕緩抽吸，使所有液體濾過硝酸纖維素濾膜，停止抽真空，重新用10×SSC灌滿各孔。
（4）將10／11RNA水溶液與下述溶液［20μl 100％甲酰胺、7μl甲醛（37％）、2μl 20×SSC］混合。於68℃溫育15分鍾，冰浴冷卻樣品（注意：變性RNA樣品液的體積並非至關重要，但溶液的終濃度應為50％甲酰胺／7％甲醛／1×SSC。每一孔最多可加20μg RNA）。
（5）每份樣品加2倍體積的20×SSC。用較小負壓輕緩抽吸，使孔內的10×SSC溶液濾過硝酸纖維素濾膜，停止抽真空。
（6）將樣品加入孔內，用較小的負壓輕緩抽吸，待所有的樣品濾過硝酸纖維素濾膜後，將每孔用200μl 10×SSC洗兩次。待第二次清洗的液體濾過硝酸纖維素濾膜後，繼續抽吸5分鍾以使濾膜幹燥。
（7）鬆開螺絲，取出多孔過濾加樣器中的硝酸纖維素濾膜，於室溫徹底晾幹，置真空烤箱於80℃幹烤2小時。
（8）按Northern印跡法的同樣方法用放射性標記探針與濾膜上的RNA進行雜交。
2.狹線雜交
（1）將一張硝酸纖維素濾膜（孔徑0.45μm）在水中浸泡片刻使之濕潤，再用20×SSC於室溫浸泡l小時。與此同時，用0.1mol／L NaOH溶液仔細清洗多孔過濾加樣器，並用滅菌水衝洗幹淨。
（2）將兩張預先用20×SSC浸濕的厚吸水紙放置在多孔過濾加樣器的抽真空板上，再將濕潤的硝酸纖維素濾膜放在吸水紙上。趕走所有氣泡。擰緊螺絲，使多孔過濾加樣器的上下兩部分夾緊。然後將抽真空板與真空管道相連接。
（3）將所有狹槽內灌滿10×SSC。用較小的負壓輕緩抽吸，使所有液體濾過硝酸纖維素濾膜，停止抽真空。重新用10×SSC灌滿各槽。
（4）將10μl RNA水溶液與下述溶液［20μl 100％甲酰胺、7μl甲醛（37％）、2μl 20×SSC］混合：將混合液於68℃溫育15分鍾，冰浴冷卻樣品。每份樣品加2倍體積的20×SSC。用較小負壓輕緩抽吸，使槽內的10×SSC溶液濾過硝酸纖維素濾膜，停止抽真空。
（5）將樣品加入槽內，用較小的負壓輕緩抽吸。待所有的樣品濾過硝酸纖維素濾膜後，將每個狹槽用1ml 10×SSC洗兩次。待第二次清洗的液體濾過硝酸纖維素濾膜後，繼續抽吸5分鍾以幹燥硝酸纖維素濾膜。
（6）鬆開螺絲，從多孔過濾加樣器中取出硝酸纖維素濾膜，於室溫晾幹，置真空烤箱於80℃幹烤2小時。
（7）按Northern印跡法的同樣方法用放射性標記探針與濾膜上的RNA進行雜交。