正文 第五章 光鏡結締組織、肌組織實驗研究(六)(1 / 3)

(五)Gomori醛晶紅法

染色步驟:

(1)切片按常規脫蠟,經下行酒精至蒸餾水。

(2)於酸化高錳酸鉀溶液氧化1分鍾。水洗後,入5%草酸漂白,充分水洗。

(3)浸入70%酒精。

(4)入醛品紅溶液,4~15分鍾,或更久。

染液的配製:堿性晶紅0.5g,70%酒精100ml,濃鹽酸1ml,三聚乙醛1ml。將堿性品紅溶於酒精,加入鹽酸和三聚乙醛。混合後24小時應呈深紫色。放置2~3天後使用。存於4℃,可用1~2個月。

(5)70%酒精浸洗,至其他結構無色。

(6)水洗後複染於0.1%美藍水溶液,或0.2%亮綠(溶於0.2%醋酸)。

(7)脫水,透明,封固。

結果:彈性纖維呈紫色。硫酸化黏蛋白,包括肥大細胞顆粒呈紫色。其他結構依複染方法而呈不同顏色。

注意事項:此染色不經複染時,染色後經上行酒精脫水,甲醛及Bouin液固定者背景無色,汞固定劑產生深紫色背景。不宜用鉻鹽固定劑固定。此法可顯示粗大及纖細的彈性纖維,但染液應在有效時間內使用。

(六)Orcein彈性纖維染色

染色步驟:

(1)各種固定液固定的組織切片,脫蠟,下行酒精,至70%酒精。

(2)入地衣紅染液,室溫過夜,或37℃,1~2小時。

染液的配製:配法之一:地衣紅1g,70%酒精100ml,濃鹽酸1ml。配法之二:地衣紅1g,70%酒精100ml,濃硝酸2ml。

(3)入70%酒精浸洗,可用1%酸酒精分色至彈性纖維與背景對比清晰為度。用蒸餾水洗淨。

(4)可進行複染,如用蘇木精染胞核。

(5)脫水,透明,封固。

結果:彈性纖維呈深棕色。其他結構染色依複染方法而異。此法簡單可靠。

(七)其他染色

其他染色也可顯示彈性纖維,如膠原纖維染色:①Heidenhain“AZAN”三色法,肌纖維及彈性纖維染色呈不同深度的紅色;②AZAN改變法,彈性纖維呈亮紅色;③Masson染色(改變法之二),彈性纖維呈棕褐色。

四、網狀纖維染色

(一)Gordon及Sweet法

染色步驟:

(1)組織的固定幾乎不受什麼限製。切片下行入水。

(2)1%高錳酸鉀水溶液氧化1~5分鍾。

(3)流水衝洗。

(4)草酸水溶液漂白。

(5)流水衝洗。

(6)入2.5%鐵礬水溶液15分鍾。

(7)蒸餾水多次換洗。

(8)氨銀液內染10~30秒鍾。

染液的配製:用5ml的10%硝酸銀水溶液,逐滴加入濃氨液直至產生的沉澱恰好溶解,再用3%氫氧化鈉5ml滴入,沉澱又發生。隨後又滴加濃氨液使銀液微顯混濁。加蒸餾水至50ml。銀液備用。

(9)蒸餾水換水數次。

(10)10%中性甲醛溶液內還原1~2分鍾。

(11)流水衝洗。

(12)0.2%氯化金水溶液,調色1~2分鍾。

(13)蒸餾水換洗3次。

(14)入5%硫代硫酸鈉水溶液3分鍾。

(15)蒸餾水多次換水漂洗。

(16)Van Gieson染液複染。

(17)脫水,透明,封固。

結果:網狀纖維呈黑色,核灰呈黑色,胞質呈黃色,肌肉呈黃色,膠原纖維呈紅色。

(二)Gomori法

染色步驟:

(1)組織的固定幾乎不受什麼限製。切片下行入水。

(2)1%高錳酸鉀水溶液氧化1~2分鍾。

(3)流水衝洗後以3%偏重亞硫酸鉀水溶液漂白至切片成白色。

(4)流水充分漂洗。

(5)入2%鐵礬水溶液2分鍾。

(6)流水充分衝洗後,蒸餾水換洗2次。

(7)入氨銀液染1分鍾。

染液的配製:用10%硝酸銀水溶液20ml加入10%氫氧化鉀4ml,充分搖蕩生成沉澱。逐滴加入濃氨液,邊加邊搖蕩至沉澱全溶,再逐滴加入10%硝酸銀使溶液微顯混濁。用等量蒸餾水稀釋,過濾後即使用。

(8)蒸餾水漂冼。

(9)10%中性甲醛溶液還原3分鍾。

(10)流水充分衝洗,蒸餾水換洗。

(11)0.2%氯化金水溶液調色約10分鍾。

(12)流水衝洗,換蒸餾水洗後以2%偏重亞硫酸鉀水溶液處理1分鍾。

(13)蒸餾水漂洗後以2.5%硫代硫酸鈉水溶液處理1~2分鍾。

(14)流水衝洗。

(15)脫水,透明,合成樹脂封固。

結果:網狀纖維呈黑色,核呈灰黑色。

注:①凡經含有重鉻酸鉀固定劑固定的組織,可不必經高錳酸鉀液氧化處理而直入氨銀液。②切片用Coplin染色缸較好,即經氨銀液後倒掉該銀液,改用蒸餾水搖蕩5秒鍾再倒掉,即直接將還原液倒入該染色缸,讓鍍銀切片還原。這一過程能大大減低切片上銀沉澱的可能性。

(三)Nassar及Shankin法

染色步驟:

(1)要求用10%中性甲醛溶液固定,石蠟切片(5μm)。切片下行入水。

(2)用0.5%高錳酸鉀水溶液與0.5%硫酸水溶液等量混合液氧化1~2分鍾至切片呈褐色。

(3)經水漂洗後,用2%草酸水溶液漂白切片2分鍾,再流水衝洗5分鍾,急轉入95%酒精內漂洗。

(4)切片入2%硝酸銀水溶液,並在該液每10ml內加吡啶(Pyridine)3滴,於50℃處理1/2~1小時。在此液內時間稍短,如30分鍾,有助於鍍染細纖維。如時間過長,如60分鍾,則有助於鍍染粗纖維。

(5)用95%酒精速漂洗後,轉入在以下配成的氨銀液內,50℃,5分鍾。

染液的配製:在1ml濃氨液內,急加入10%硝酸銀水溶液7ml,隨即逐滴加入10%硝酸銀水溶液,邊加邊搖蕩。至銀液略顯混濁,再以等量蒸餾水稀釋,並在每10ml銀液內滴加吡啶3滴。

(6)用95%酒精速漂洗後,在等量的2%中性甲醛溶液與無水酒精的混合液內還原2分鍾。

(7)蒸餾水充分漂洗後在0.2%或0.1%的氟化金水溶液內調色,至切片轉成灰色,約1分鍾。

(8)蒸餾水漂洗後,入5%硫代硫酸鈉水溶液內2分鍾。

(9)流水衝洗後,明礬-蘇木精液染核。

(10)脫水,透明,合成樹脂封固。

結果:網狀纖維呈黑色,膠原纖維呈灰色,細胞核呈藍色。

(四)Del Rio Hortega法