（二）活性測定
方法一：取2支試管，都分別加入3.0mL 50mmol/L、pH 8.8硼酸緩衝液、0.5mL 20mmol/L l-苯丙氨酸溶液。向一支試管中加入0.5mL酶提取液，另一支試管中加入0.5mL經煮沸5min的失活酶液作為對照。然後，將2支試管置於37℃保溫60min。保溫結束時立即向2支反應管中分別加入0.1mL 6mol/L鹽酸溶液以終止反應。以蒸餾水為參比空白調零，分別測定樣品反應管和對照反應管中溶液在波長290nm處的吸光度值（OD1和OD0）。重複三次。
方法二：取1支反應管，加入3mL 50mmol/L、pH 8.8硼酸緩衝液和0.5mL 20mmol/L l-苯丙氨酸，在37℃預保溫平衡10min，再加入0.5mL酶液，混合後，迅速測定一次該混合液在波長290nm處的吸光度值作為反應的初始值（OD0）。然後將反應管置於37℃保溫60min。保溫結束時再立即測定一次反應混合液在波長290nm處的吸光度值作為反應的終止值（OD1）。注意均以蒸餾水作為參比空白進行調零。根據保溫前後樣品管溶液吸光度值的變化，可計算PAL活性。重複三次。
實驗結果與計算
1.測定數據記錄
2.計算結果
根據反應液的吸光度值差值（OD1-OD0），計算苯丙氨酸解氨酶活性。以每小時每克果蔬組織（鮮重）酶促反應體係吸光度值增加0.01為1個PAL活性單位（U），表示為0.01ΔOD290/h·g mF。
注意事項
(1)原裝β-巰基乙醇物質的量濃度大約為14.3mmol/L；EDTA的相對分子質量為292.25；l-苯丙氨酸的相對分子質量為165.19；濃鹽酸物質的量濃度為12mmol/L。
(2)加入聚乙烯砒硌烷酮（PVP）或PolyclarAT，以除去酚類物質對酶活性的影響，並防止其對吸光度值的幹擾。
(3)也可以每小時使反應體係在波長290nm處吸光度值增加0.01所需的酶量為1個苯丙氨酸解氨酶活性單位（U），表示為0.01ΔOD290/h·mg蛋白質。另外，根據反式肉桂酸在290nm吸光度值標準曲線，可用酶促反應產物反式肉桂酸的生成量來表示PAL酶活性。
思考題
在以上幾種PAL活性測定方法中，設置的空白管或對照管各有什麼意義？