目的要求
學習果蔬組織中苯丙氨酸解氨酶活性的測定原理和方法。
基本原理
苯丙氨酸解氨酶（phenylalamine ammonia lyase，PAL）是許多植物次生物質（如黃酮類物質、酚類物質、木質素和水楊酸等）生物合成途徑——苯丙烷代謝的關鍵酶，與植物的抗逆境脅迫和抗病性密切相關，在植物的正常生長發育和抵禦病原菌侵害過程中起著重要作用。
PAL催化L-苯丙氨酸裂解脫氨反應，形成的產物反式肉桂酸化合物（trans-cinnamic acid）在290nm處有最大光吸收值。該酶活性的變化可以根據其催化形成的產物反式肉桂酸在290nm吸光度值的變化進行測定。在1cm光程下當吸光度值變化0.01，就有1μg反式肉桂酸量的變化。若酶的加入量適當，反應體係在波長290nm處吸光度值的升高速率可在幾小時內保持不變。
材料、儀器及試劑
（一）材料
梨、蘋果、馬鈴薯。
（二）儀器及用具
高速冷凍離心機、研缽、紫外分光光度計、計時器、移液器、離心管、容量瓶（100mL、20mL、1000mL）、試管、水浴鍋。
（三）試劑
1.0.1mol/L、pH 8.8硼酸-硼砂緩衝液
母液A和母液B的配製方法見附錄1。
取66.67mL母液A和33.33mL母液B混合後，調節pH至8.8，稀釋至200mL。
2.50mmol/L、pH 8.8硼酸-硼砂緩衝液
3.提取緩衝液（含40g/L PVP、2mmol/L EDTA和5mmol/L β-巰基乙醇）
取4g PVP、58mg EDTA、35μL β-巰基乙醇，加0.1mol/L、pH 8.8硼酸緩衝液溶解，定容至100mL，低溫（4℃）保存備用。
4.20mmol/L l-苯丙氨酸溶液
稱取330mg l-苯丙氨酸，用50mmol/L、pH 8.8硼酸緩衝液溶解，定容至100mL。
5.6mol/L鹽酸溶液
取10mL濃鹽酸溶液，稀釋到20mL。
實驗步驟
（一）酶液製備
稱取5.0g果蔬組織樣品，置於研缽中，加入5.0mL提取緩衝液，在冰浴條件下研磨成勻漿。將勻漿液全部轉入到離心管中，於4℃、12000×g離心30min，收集上清液，即為粗酶提取液，低溫保存備用。