H2O2與四氯化鈦（或硫酸鈦）反應生成的過氧化物-鈦複合物黃色沉澱，溶解於硫酸後，可在波長412nm處比色測定。在一定範圍內，其顏色深淺與H2O2濃度呈線性關係。
材料、儀器及試劑
（一）材料
蘋果、番茄、芒果、桃等。
（二）儀器及用具
研缽、移液器、容量瓶（100mL）、離心管、試管、高速冷凍離心機、分光光度計、通風櫥。
（三）試劑
1.-20℃預冷丙酮
2.濃氨水
3.2mol/L硫酸
取10mL濃硫酸，稀釋到90mL。
4.10%（體積分數）四氯化鈦-鹽酸溶液
在通風櫥中，將10mL四氯化鈦緩慢加入到90mL濃鹽酸中。輕輕地在操作台上平搖，使四氯化鈦充分溶解。將試劑轉入到棕色瓶中，密閉，4℃保存。
5.100μmol/L H2O2-丙酮試劑
取57μL 30%分析純H2O2溶液，溶於重蒸水中，稀釋，定容至100mL，得10mmol/L H2O2溶液。取1mL該溶液，溶於丙酮中，並用丙酮定容至100mL，即為100μmol/L H2O2-丙酮試劑。
實驗步驟
（一）標準曲線的製作
取6支試管，編號，在通風櫥中向各試管中加入所列各試劑，並進行相應的操作。在加入四氯化鈦和濃氨水時，要直接加入到溶液中，以減少揮發損失和管壁附著損失。
加入2mol/L硫酸後，搖動，使沉澱完全溶解。以0號管為參比調零，於波長412nm處比色測定溶液的吸光度值。以吸光度值為縱坐標，H2O2物質的量（μmol）為橫坐標，製作標準曲線。
（二）提取
稱取5.0g新鮮果蔬組織樣品，加入5.0mL預冷的丙酮，在通風櫥中冰浴條件下研磨成勻漿後，於12000×g、4℃離心20min，收集上清液即為樣品提取液。
（三）測定
吸取1.0mL樣品提取液，按照與製作標準曲線相同的方法進行測定。但是需用-20℃預冷丙酮將離心得到的沉澱物反複洗滌2～3次，直到除去色素。再向洗滌後的沉澱中加入3.0mL 2mol/L硫酸，待完全溶解後進行比色測定。重複三次。
實驗結果與計算
根據溶液吸光度值，從標準曲線上查出相應的過氧化氫的物質的量，計算每克果蔬組織（鮮重）中過氧化氫的含量，表示為μmol/g mF。
注意事項
(1)也可用5%硫酸鈦代替10%四氯化鈦進行實驗。在配製四氯化鈦溶液時，一定要在通風櫥中小心仔細地進行操作。
(2)在測定過程中滴加四氯化鈦溶液和濃氨水時，要將它們直接滴加到試管內的溶液中，不能掛壁，然後迅速混勻。
思考題
加入的四氯化鈦和濃氨水的量對測定結果有什麼影響？
Ⅲ.過氧化氫酶活性測定
目的要求
學習果蔬組織中過氧化氫酶活性的測定原理和方法。
基本原理
過氧化氫酶（catalase,CAT）屬於血紅蛋白酶，含有鐵，它能催化植物體內積累的過氧化氫（H2O2）分解為水和分子氧，從而減少H2O2對果蔬組織可能造成的氧化傷害。
在過氧化氫酶催化H2O2分解為水和分子氧的過程中，該酶起電子傳遞作用，而H2O2既是氧化劑又是還原劑。
因此，可根據反應過程中過氧化氫的消耗量來測定該酶的活性。過氧化氫在波長240nm處具有吸收峰，利用紫外分光光度計可以檢測過氧化氫含量的變化。
材料、儀器及試劑
（一）材料
蘋果、梨、番茄等。
（二）儀器及用具
研缽、高速冷凍離心機、紫外分光光度計、計時器、移液器、離心管、容量瓶（100mL、1000mL）。
（三）試劑
1.0.1mol/L、pH 7.5磷酸鈉緩衝液
配製方法見附錄1。
2.50mmol/L、pH 7.5磷酸鈉緩衝液
3.提取緩衝液（含5mmol/L DTT和5% PVP）
稱取77mg DTT、5g PVP，用0.1mol/L、pH 7.5磷酸鈉緩衝液溶解，定容至100mL，即得提取緩衝液，低溫（4℃）貯藏備用。
4.20mmol/L H2O2溶液
吸取227μL的30% H2O2溶液，用50mmol/L、pH 7.5的磷酸鈉緩衝液稀釋至100mL，現用現配，低溫避光保存。
實驗步驟
（一）酶液製備
稱取5.0g果蔬樣品，置於研缽中，加入5.0mL提取緩衝液，在冰浴條件下研磨成勻漿，於4℃、12000×g離心30min，收集上清液，即為酶提取液。低溫保存備用。
（二）活性測定
酶促反應體係由2.9mL 20mmol/L H2O2溶液和100μL酶提取液組成。以蒸餾水為參比空白，在反應15s時開始記錄反應體係在波長240nm處吸光度值，作為初始值，然後每隔30s記錄一次，連續測定，至少獲取6個點的數據。重複三次。
實驗結果與計算
1.測定數據記錄
2.計算結果
記錄反應體係在波長240nm處的吸光度值，製作OD240值隨時間變化曲線，根據曲線的初始線性部分(從時間I到時間F)計算每分鍾吸光度變化值ΔOD240。