我國食品衛生標準對蒸餾酒和配製酒的規定是:以糧穀類為原料者甲醇含量不得超過0.04g/100mL;以薯幹及代用品為原料者不得超過0.12g/100mL。以上係指酒精體積分數為60%的蒸餾酒的標準,高於或低於60%者,按60%折算。
白酒中甲醇的測定可采用品紅-亞硫酸法。
1.原理
甲醇經氧化成甲醛後,與品紅-亞硫酸作用生成藍紫色化合物,根據顏色的深淺與標準係列比較定量。最低檢出濃度為0.02g/100mL。
2.試劑
(1)高錳酸鉀-磷酸溶液:稱取3g高錳酸鉀,加入85%磷酸15mL與水70mL的混合液中,溶解後加水至100mL。貯於棕色瓶內。為防止其氧化力下降,保存時間不宜過長。
(2)草酸-硫酸溶液:稱取無水草酸5g或H2C2O4·2H2O7g溶於硫酸(1+1)中至100mL。
(3)品紅-亞硫酸溶液:稱取堿性品紅0.1g,研細,分次加入共60mL、80℃的水,邊加水邊研磨使其溶解,用滴管吸取上層溶液濾於100mL容量瓶中,冷卻後加入100g/L亞硫酸鈉溶液10mL,鹽酸1mL,再加水至刻度,充分混勻,放置過夜。如溶液帶有顏色,可加入少量活性炭,攪拌後過濾,貯於棕色瓶中,置暗處保存。溶液呈紅色時應棄去重新配製。
(4)甲醇標準溶液:稱取甲醇1.000g,置於100mL容量瓶中,加水至刻度,置低溫保存。此溶液含甲醇10mg/mL。
(5)甲醇標準使用液:吸取甲醇標準溶液10.0mL,置於100mL容量瓶中,加水稀釋至刻度。此溶液含甲醇1mg/mL。
(6)60%無甲醇的乙醇水溶液:取300mL無水乙醇,加水稀釋至500mL。吸取1mL此溶液按檢驗方法檢查不應呈色,否則需按下法製備:
取95%乙醇300mL,加入少許高錳酸鉀,蒸餾,收集餾出液。在餾出液中加入硝酸銀溶液(取1g硝酸銀溶於少量水中)和氫氧化鈉溶液(取1.5g氫氧化鈉溶於少量水中),搖勻,取上清液蒸餾,棄去最初50mL餾出液,收集中間餾出液約200mL,用酒精密度計測其濃度,然後加水配成60%無甲醇的乙醇溶液。
(7)100g/L亞硫酸鈉溶液:存於冰箱中,一周內可用。
3.儀器
分光光度計。
4.檢驗方法
根據樣品中乙醇濃度,吸取適量蒸餾後的酒樣或原料(乙醇濃度60%取1.00mL,50%取1.20mL,40%取1.50mL,30%取2.00mL)置於25mL具塞比色管中。
吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL甲醇標準使用液(相當0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg甲醇)分別置於25mL具塞比色管中,並加入60%無甲醇的乙醇水溶液1mL。
於樣品管及標準管中各加水至5mL,依次加入2mL高錳酸鉀-磷酸溶液,混勻,放置10min後加入草酸-硫酸溶液2mL,混勻使之退色,再各加入品紅-亞硫酸溶液5mL,混勻,於20~30℃靜置30min,用2cm比色杯,以零管調節零點,於波長590nm處測量吸光度,繪製標準曲線,比較定量,或與標準色列目視比較定量。
5.計算
6.說明
(1)配製品紅-亞硫酸溶液時,亞硫酸鈉的加入量要適當,過量時會降低呈色反應的靈敏度。品紅-亞硫酸溶液宜於冷、暗處保存。室溫下可保存10d左右。
(2)甲醇呈色反應的靈敏度與溶液中乙醇濃度相關,乙醇濃度過低或過高,均會導致顯色靈敏度下降。溶液中的乙醇濃度以4%~5%為宜。測定時必須確保樣品管與標準管中乙醇濃度一致。
(3)試驗酸度不足時,可能造成假陽性;酸度過高時會降低顯色的靈敏度。本法是利用甲醇被氧化生成甲醛後呈色定量,在定量結果的判定時,應首先考慮樣品中是否含有甲醛,若樣品中含有甲醛,則需再測定甲醛含量,從中減去之或預先將樣品除去甲醛,再定量甲醇。
(4)酒樣中如含氧化後能生成甲醛的物質如甘油、果膠等,也影響測定結果。此時可取測定乙醇濃度的酒樣測定甲醇。
(5)酒中其他醛類以及經高錳酸鉀氧化後生成的醛類(如乙醛、丙醛……),與品紅-亞硫酸作用也呈色,但在一定濃度的硫酸酸性溶液中,除甲醛可形成曆久不退的藍紫色外,其他醛類的呈色則曆時不久即行消退,甚至不呈色,故不幹擾測定。
(6)除甲醛的方法:吸取100mL酒樣於蒸餾瓶中,加入50g/L硝酸銀溶液5mL、5g/L氫氧化鉀溶液0.1mL,放置片刻,加入50mL水,蒸餾。收集餾出液100mL供測定。
(7)在測定過程中,加入草酸-硫酸溶液後,溶液中產生熱量。此時應適當冷卻,待溶液降溫後,再加入品紅-亞硫酸溶液,以免呈色劑分解。若室溫較低時,應先將溶液浸入(28±2)℃溫水浴中,再行呈色,並控製時間為30min。
白酒中甲醇的測定還可采用變色酸光度法,具體見第十一章實驗十一。
(四)紫外分光二階導數光譜掃描法鑒別真、假“五糧液”酒
“五糧液”酒是四川省宜賓市五糧液酒廠的獨家產品,是中國的主要名酒之一,在中、外消費者中享有較高聲譽。五糧液酒的生產曆史悠久。源遠流長,是糧食食品中檔次較高的飲料酒。近幾年來,有些假冒五糧液酒的偽劣產品在市場上時有出現,因此加強五糧液酒的檢驗,尤為重要。
目前,對於真、假五糧液酒品的檢驗方法,可應用氣相色譜鑒定法、紫外分光二階導數光譜掃描法來檢測。但氣相色譜法較費時間且條件也較難於掌握。最近有些科研部門應用紫外分光二階導數光譜掃描法鑒別真假五糧液酒品已取得可喜成效。因為五糧液酒品的釀造方法獨特,且釀造條件、釀造酒所用菌種、菌相較為穩定,所以酒中的有機成分(高級酯類物質等)也相應穩定,這就為用紫外分光二階導數光譜掃描法來鑒別真假五糧液酒提供了有利條件。經試驗,該方法所得的結果與氣相色譜法的相符,並具有科學、快速、簡便、直觀等特點。
1.原理
五糧液酒中含有多種高級酯類物質,它們在紫外區有明顯吸收,用二階導數可以導出其特征吸收峰,得出一張較為完整的導數光譜圖。由於不同酒類中的高級酯類物質含量不同,其導數光譜也不同,通過比較光譜圖,可以有效地區別各種酒類。
2.儀器
UV-260型紫外分光光度計。
條件:1nm狹縫;190~360nm波長;二階導數光譜掃描方式;1cm石英比色杯。
3.試劑和材料
(1)無水酒精(優級純)、去離子水。
(2)標準五糧液酒。
(3)五糧液酒樣品。
(4)對照酒樣小橋酒、瀘酒、瀘州高粱酒。
(5)參比溶液將待測酒樣蒸餾,測定其酒精濃度,再配製與其相同酒精濃度的酒精參比溶液。
4.檢驗方法
將經過蒸餾的酒樣置於1cm石英比色杯中,以相同酒精濃度的酒精溶液為參比,在狹縫為1nm、波長為190~360nmn條件下,對酒樣進行二階導數光譜掃描,記錄光譜圖。
5.結果分析
(1)導數光譜的選擇對酒樣進行導數光譜掃描,一階導數光譜曲線較為平滑,沒有特征,三階導數光譜圖較為複雜,沒有明顯吸收峰,二階導數光譜圖曲線較有特色,有理想的吸收峰。所以選用二階導數光譜進行試驗。
(2)酒精幹擾的扣除酒精體積分數為52%、39%的酒精參比溶液在波長190~360nm範圍內有明顯的吸收峰,扣除幹擾後,基線較為平整。
(3)標準五糧液酒二階導數光譜圖的製作以酒精參比溶液為參比,在波長190~360nm範圍內對酒精體積分數為52%、39%的標準酒樣進行二階導數光譜掃描,記錄光譜圖。
(4)五糧液酒與其他酒類二階導數光譜圖的比較以酒精為參比溶液,在波長190~360nm範圍內對小橋酒、瀘酒、瀘州高粱酒進行二階導數光譜掃描,記錄光譜圖。其光譜圖與五糧液酒光譜圖有明顯差別。