(4)正式測定精確吸取費林試劑A和B各5mL,置於1個250mL錐形瓶中,用滴定管迅速滴加比預測值少0.5~1.0mL的待測糖液,在電爐上迅速煮沸2min,加入2滴亞甲藍指示劑,在保持沸騰的狀態下,繼續用待測糖溶液滴定至藍色剛好消失。
(三)比色法
1.原理
乳糖在苯酚、氫氧化鈉、苦味酸(2,4,6-三硝基苯酚)和亞硫酸氫鈉的作用下,可生成橘紅色的絡合物,絡合物顏色的深淺與乳糖的含量成正比,故可借比色法測定乳糖的含量。本法檢測範圍為0.2~2.0mg乳糖。蔗糖不幹擾本法測定。
2.儀器
分光光度計;離心機。
3.試劑
(1)乳糖標準溶液(1mg/mL):精確稱取於105℃下烘幹至恒重的乳糖0.2500g於燒杯中,加少量水溶解後,定量地轉移到250mL容量瓶中。燒杯用少量蒸餾水分3次洗滌,洗滌用水也一並轉入容量瓶中,搖勻後稀釋至刻度。
(2)4.5%氫氧化鋇溶液:用新煮沸過又冷卻了的蒸餾水配製,貯存期間要避免接觸二氧化碳。
(3)5%硫酸鋅溶液。
(4)1%苯酚溶液:用新蒸餾過的苯酚配製,避光保存。
(5)5%氫氧化鈉溶液。
(6)1%苦味酸溶液。
(7)1%亞硫酸氫鈉溶液。
(8)顯色劑:取1%苯酚溶液10mL,置於棕色試劑瓶中,順序加入20mL5%氫氧化鈉溶液、20mL1%苦味酸溶液和10mL1%亞硫酸氫鈉溶液,搖勻。此顯色劑的保存期為2d,最好現用現配。
4.檢驗方法
(1)樣品的處理精確吸取2.0mL牛乳(或精確稱取1.000g乳粉,用水溶解後定量轉移)於100mL容量瓶中,用蒸餾水稀釋至刻度,搖勻。精確吸取2.5mL稀釋乳液於幹燥、潔淨的離心管中,精確加入2.0mL5%硫酸鋅溶液和0.5mL4.5%的氫氧化鋇溶液,攪勻,使蛋白質沉澱。然後,在離心機中以2000r/min離心2min,取上層清液用於乳糖含量的測定。
(2)標準曲線的繪製取6支25mL比色管,用吸量管精確加入給定的溶液,搖勻。
用塞子塞緊比色管,放在沸水浴中加熱6min後取出,立即在冷水中冷卻至室溫,然後用蒸餾水稀釋至刻度,搖勻。
以1號管為空白調零,用分光光度計在波長520nm處測定其他各管的吸光度。以乳糖含量為橫坐標,相應的吸光度為縱坐標,繪出含量(mg)-吸光度標準曲線圖。
(3)測定精確吸取1.0mL經離心澄清後的牛乳樣品液(或0.5mL乳粉澄清液)和2.5mL顯色劑於25mL的比色管中,搖勻後在沸水浴中加熱6min。另取一支比色管,不加樣品,隻加入2.5mL顯色劑和1.0mL蒸餾水,同樣加熱6min,作為空白對照。
取出比色管,迅速用冷水冷卻,用水稀釋至刻度,搖勻。以空白管調零,在波長520nm處測定樣品的吸光度,並在標準曲線上查出其含量(ρ)。
六、牛乳中氯離子含量及氯糖數的測定
(一)牛乳中氯離子含量的測定(莫爾法)
正常、新鮮的牛乳,其氯離子的含量一般在0.12%以下,氯糖數應小於4。如果氯離子含量大於0.12%,氯糖數大於4,可能奶牛患有乳腺炎或牛乳中摻有食鹽。
1.原理
在一定量的牛乳中加入一定量的鉻酸鉀和硝酸銀,對於正常新鮮的牛乳來講,由於乳中氯離子含量很低,硝酸銀主要與鉻酸鉀反應,生成紅色鉻酸銀沉澱;如果牛乳中摻有氯化鈉,由於氯離子的濃度增大,硝酸銀則主要與氯離子反應,生成氯化銀沉澱,並且被鉻酸鉀染成黃色。
2.儀器
滴定管(棕色、酸式)。
3.試劑
(1)0.02871mol/LAgNO3標準溶液:稱取硝酸銀(分析純)4.7880g,用少量無離子水溶解後,定量地轉移到1000mL棕色容量瓶中,再用無離子水稀釋至刻度。此標準硝酸銀溶液的滴定度為0.001g氯/mL。
(2)20%硫酸鋁溶液。
(3)2mol/LNaOH溶液。
(4)10%鉻酸鉀指示劑。
本實驗中所有試劑都需用無離子水(交換水)配製,如沒有無離子水,也可使用二次蒸餾的蒸餾水。
4.檢驗方法
精確吸取40mL牛乳於250mL容量瓶中,加入20mL20%硫酸鋁溶液和16mL2mol/LNaOH溶液,搖勻後,用無離子水稀釋至刻度。搖勻,過濾,將濾液收集於幹燥、潔淨的容器中,用pH試紙檢查濾液的pH。
精確吸取50mL樣品濾液於250mL錐形瓶中,用氫氧化鈉溶液或稀硝酸溶液將其pH調為6~10,最好調成pH為7~8(如濾液的pH已在此範圍,此步操作可省略)。加入1mL 10%鉻酸鉀指示劑,搖勻後用標準硝酸銀溶液滴定至出現的磚紅色經劇烈搖動不退色為止,即為滴定終點。記下硝酸銀溶液的消耗量。
5.計算
(二)牛乳中氯糖數的計算
牛乳的氯糖數=氯離子含量/乳糖的含量×100
式中,乳糖的含量(g/100mL)同上“五、牛乳中乳糖含量的測定”。
正常、新鮮的牛乳,其氯糖數應小於4。如果大於4,可能奶牛患有乳腺炎或牛乳中摻有食鹽。
通過對牛乳的常規檢驗,可對牛乳的品質作出以下判斷:
(1)各項指標均在正常值範圍,說明牛乳是正常的、新鮮的。
(2)其他指標正常,但酸度低於正常值,氯糖數超出4,說明奶牛患有乳腺炎。
(3)牛乳的相對密度、酸度、脂肪和乳糖含量均低於正常值,可判定為摻水乳。根據測定值與正常值的比較,可粗略估計出摻水比例。
(4)如脂肪和乳糖含量均低於正常值,酸度高於正常值,則可能是酸敗乳。脂肪和乳糖含量均正常,但酸度明顯低於正常值,則可能摻有堿性中和劑。
(5)相對密度正常,但脂肪和乳糖含量均低於正常值,則可能是同時摻入水和可提高密度的物質(如電解質、非電解質和膠體物質等)。