40%氫氧化鈉溶液:稱取20g氫氧化鈉溶於500mL蒸餾水中。
68%中性酒精:用吸量管精確吸取17mL95%酒精於幹燥、潔淨的50mL錐形瓶中,加入1~2滴1%酚酞。搖勻後,用氫氧化鈉溶液滴定至酚酞指示劑剛顯粉紅色,記下所用氫氧化鈉溶液的體積。然後用吸量管向錐形瓶中精確加入VmL(V=6.25——中和酒精所用的氫氧化鈉體積)新煮沸過又冷卻了的蒸餾水,搖勻,即得68%的中性酒精。用橡皮塞塞住錐形瓶口備用。此試劑必需臨用時現配,不宜保存。
4.檢驗方法
在幹燥、潔淨的試管中,加入3mL待檢乳,然後加入等體積的68%的中性酒精,搖勻,觀察其反應現象。如果出現絮狀沉澱,則說明乳的酸度超過20°T;如果不出現絮狀沉澱,則說明乳的酸度不高於20°T。
(二)氫氧化鈉滴定法
1.原理
以酚酞為指示劑,用0.1mol/LNaOH標準溶液滴定100mL乳樣中的酸,至終點時所消耗氫氧化鈉溶液的體積即為牛乳的酸度。
2.儀器
滴定管(堿式)。
3.試劑
1%酚酞指示劑;0.1mol/LNaOH標準溶液。
4.檢驗方法
用移液管精確吸取10mL待檢乳於200mL錐形瓶中,加入約20mL新煮沸過又冷卻了的蒸餾水和2~3滴酚酞指示劑,搖勻後,用標準氫氧化鈉溶液滴定至酚酞剛顯粉紅色並在1min內不退色為止,記下所消耗的氫氧化鈉體積(mL)。
重複測定1次,記下所消耗的氫氧化鈉溶液體積(mL),兩次滴定之差不得大於0.05mL,否則需要重複滴定。
五、牛乳中乳糖含量的測定
牛乳中乳糖含量約為4.7%。牛乳存放時間過長,微生物將會發酵乳糖產生乳酸,而使乳糖含量下降。所以通過測定乳糖含量可以判斷牛乳是否腐敗變質。
(一)折光法
折光法是一種常用的測定生物樣品中糖含量的簡便測定法,其特點是簡單、快速,結果也相當準確。
1.原理
正常情況下,液態食品的折射率有一定的範圍,牛乳中乳糖含量改變時,折射率會發生變化。通過測定牛乳的折射率,可以確定牛乳中乳糖的含量。
2.儀器
阿貝折光儀。
3.試劑
4%氯化鈣溶液。
4.檢驗方法
吸取乳樣5mL於幹燥、潔淨試管中,加入5~6滴4%的氯化鈣溶液,用橡皮塞塞住試管口後,置沸水浴內加熱10min。取出試管,用幹燥漏鬥將乳清液濾到另一幹燥潔淨的試管中。待濾液冷卻到15~20℃時,取1滴乳清液測定折射率。
對於一般的測定,可以在室溫下進行。如需精確測定,則應在折光儀上接通恒溫裝置,並在加入待測樣以後,需恒溫5~10min再進行測定。
(二)滴定法
1.原理
乳糖是還原糖,以亞甲藍為指示劑,用費林試劑進行滴定,在滴定過程中,還原糖首先把費林試劑還原為紅色的氧化亞銅沉澱,然後稍過量的還原糖把藍色的亞甲藍還原成無色,以此指示終點的到達。
氧化情況隨反應條件(反應時的溫度、反應時間、反應時溶液的pH等)的不同而有所差異。所以,用滴定法測定還原糖含量時,必須嚴格控製反應條件。
在用滴定法測還原糖的操作中,是用糖提取液在沸騰的條件下滴定一定數量的費林試劑,糖提取液中的其他物質(如蛋白質、維生素C等),對反應有幹擾,必須預先去除。
非還原性糖(主要是蔗糖)經水解後可轉化為還原性單糖,也可用此方法測定,但在計算時應乘以係數0.95。
2.儀器
滴定管(酸式)。
3.試劑
(1)費林試劑
①費林試劑甲液:稱取15g硫酸銅(CuSO4·5H2O)及0.05g次甲基藍,溶於水中並稀釋到1000mL。
②費林試劑乙液:稱取50g酒石酸鉀鈉及75g氫氧化鈉,溶於水中,再加入4g亞鐵氰化鉀,完全溶解後,用水稀釋至1000ml,貯存於橡皮塞玻璃瓶中。
(2)亞甲基藍指示劑:1%水溶液。
(3)醋酸鋅溶液:取21.9g結晶醋酸鋅[Zn(C2H3O2)2·2H2O]於燒杯中,加入3mL冰醋酸和少量蒸餾水,溶解後用蒸餾水衝洗至100mL。
(4)10.6%亞鐵氰化鉀溶液。
(5)草酸鉀(或草酸鈉)粉末:無水,分析純。
4.檢驗方法
(1)堿性酒石酸銅溶液的標定精確吸取堿性酒石酸銅甲液和乙液各5mL,置於250mL錐形瓶中,加水10mL,加玻璃珠3粒。從滴定管滴加約9mL葡萄糖標準溶液,加熱使其在2min內沸騰,準確沸騰30s,趁熱以每2s1滴的速度繼續滴加葡萄糖標準溶液,直至溶液藍色剛好退去為終點。
記錄消耗葡萄糖標準溶液的總體積。平行操作3次,取其平均值,按下式計算:
F=ρV
式中F——費林試劑對乳糖的滴定度(10mL堿性酒石酸銅溶液相當於葡萄糖的質量),mg
ρ——葡萄糖標準溶液的濃度,mg/mL
V——標定時消耗葡萄糖標準溶液的總體積,mL
(2)樣品的處理精確吸取25mL牛乳於250mL容量瓶中,緩慢加入5mL醋酸鋅溶液及5mL亞鐵氰化鉀溶液,振搖1min,以使蛋白質凝固沉澱,加水至刻度,搖勻,放置30min。
用潔淨、幹燥的漏鬥和幹燥濾紙將其過濾,棄去初濾液(20~30mL)。在濾液中加入少許無水草酸鉀(或草酸鈉)粉末,搖勻,以去除過量的醋酸鋅。再用幹燥漏鬥和幹燥濾紙過濾,濾液收集於幹燥的燒杯中,以測定乳糖含量。
(3)預測采用直接滴定法要求很快到達反應終點,否則誤差會很大。為求出待測糖溶液的大致量,必須先預測。在1個250mL錐形瓶中,用移液管加入費林試劑A和B各5mL,搖勻,將試劑迅速於電爐上煮沸,在保持沸騰的狀態下,用待測糖溶液迅速滴定至藍色變淺,然後加入2滴亞甲藍指示劑,繼續用糖液滴定至藍色剛好消失為止,記下所用的體積。