EI源。
電子轟擊能：70eV。
離子源溫度：200℃。
接口溫度：285℃。
溶劑延遲：12min。
EI源檢測特征質譜峰：克侖特羅：m/z 86、187、243、262；美托洛爾：m/z 72、223。
（5）測定吸取1μL衍生的試樣液或標準液注入氣質聯用儀中，以試樣峰（m/z 86、187、243、262、264、277、333）與內標峰（m/z 72、223）的相對保留時間定性，
要求試樣峰中至少有3對選擇離子相對強度（與基峰的比例）不超過標準相應選
擇離子相對強度平均值的±20%或3倍標準差。以試樣峰（m/z 86）與內標峰（m/z 72）的峰麵積比單點或多點校準定量。
5.計算
方法精密度：在重複性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的20%。
本方法檢出限為0.5μg/kg。線性範圍：0.025～2.5ng。
（二）高效液相色譜法（HPLC）
具體操作見“第十一章實驗二十二”。
八、硝基呋喃類代謝物殘留量的測定
（液相色譜-串聯質譜法）
動物源性食品中抗生素殘留量超標已嚴重製約我國的經濟發展，同時對人類的健康構成威脅。硝基呋喃類藥物［呋喃唑酮（AOZ）、呋喃它酮（AMOZ）、呋喃西林（SEM）、呋喃妥因（AHD）］是一種廣譜抗菌素，能幹擾細菌氧化酶係統，發揮殺菌防腐作用。用於治療家禽腸炎、腹瀉和球蟲病。如長期連續使用，會在豬、雞肝髒中殘留，被人食用後，能引起出血綜合征、誘發基因變異和腫瘤。由於其毒性較大，我國2002年發布的《食用動物禁用的獸藥及其它化合物清單》已明令禁止使用。因此，檢測動物源性食品中抗生素的殘留量具有重要現實意義。動物源性食品中硝基呋喃類代謝物殘留量的檢測方法主要是高效液相色譜法。
1.原理
樣品中殘留的硝基呋喃類抗生素代謝物在酸性條件下水解，用2-硝基苯甲醛衍生化，經固相萃取柱淨化後液相色譜-串聯質譜法測定，內標法定量。
2.試劑
（1）水：超純水（電阻率≥18.2MΩ）。
（2）甲醇：色譜純。
（3）乙腈：色譜純。
（4）乙酸乙酯：色譜純。
（5）磷酸氫二鉀。
（6）甲酸：優級純。
（7）二甲亞碸：優級純。
（8）鹽酸：優級純。
（9）氫氧化鈉：優級純。
（10）2-硝基苯甲醛（2-NBA）：純度≥99%。
（11）0.5mol/L K2HPO4溶液：稱取5.7g磷酸氫二鉀，用水溶解，定容至50mL。
（12）0.2mol/L HCl溶液：量取17mL濃鹽酸用水定容至1000mL。
（13）1mol/L NaOH溶液：稱取40g氫氧化鈉，用水溶解，定容至1000mL。
（14）8.0g/L 2-硝基苯甲醛溶液：稱取80mg 2-硝基苯甲醛溶於10mL二甲亞碸，臨用前配製。
（15）Oasis HLB固相萃取柱或相當者：60mg， 3mL。使用前分別用3mL乙酸乙酯、3mL甲醇和5mL水預處理，保持柱體濕潤。
（16）AMOZ、SEM、AHD、AOZ及同位素內標物AOZ-D4、AMOZ-D5、AHD-D3和SCA-13C-15N2標準物質：純度≥98%。
（17）0.10mg/mL標準貯備溶液：精確稱取四種硝基呋喃類代謝物標準物質及四種相應的同位素內標物，分別用甲醇配成0.10mg/mL的標準貯備溶液。-18℃避光保存，保存期為3個月。
（18）1μg/mL混合標準貯備溶液：吸取四種硝基呋喃類代謝物標準貯備溶液，用甲醇配成1μg/mL溶液。-18℃避光保存，保存期為3個月，使用前回溫到室溫。
（19）100μg/mL混合內標工作溶液：吸取4種硝基呋喃類代謝物同位素的標準貯備溶液，用甲醇配成100ng/mL溶液。-18℃避光保存，保存期為3個月，使用前回溫到室溫。
（20）混合標準工作溶液：根據需要，臨用前吸取一定量的混合標準貯備溶液，用甲醇稀釋配製適當濃度的混合標準工作液。
3.儀器和設備
液相色譜串聯四極杆質譜儀［配有電噴霧（ESI）離子源］；恒溫振蕩器；固相萃取裝置；高速台式離心機（5000r/min）；氮氣吹幹儀；pH計。
4.檢驗方法
（1）提取稱取10g均質試樣（精確到0.01g）於50mL聚丙烯離心管中，加入100μL內標工作溶液（4.23），分別加入25mL 0.2mol/L HCl溶液和0.5mL衍生劑，渦漩混合1min，置於37℃恒溫振蕩器中保持16h。
（2）淨化將上述提取溶液取出放置至室溫，加入1mL 0.5mol/L K2HPO4溶液，用1mol/L NaOH溶液調節溶液pH至7.0～7.4，以4500r/min的速度離心15min，上清液過Oasis HLB或相當的固相萃取柱，調節流速小於等於2mL/min，待樣液全部通過固相萃取柱後，用3mL水洗固相萃取柱，棄去全部流出液。負壓下抽幹固相萃取柱10min，再用6mL乙酸乙酯洗脫被測物，洗脫液全部收集於10mL離心管中，並在氮氣吹幹儀上40℃水浴吹幹，用1mL乙腈與0.4%甲酸水溶液（10+90）溶解殘渣，過0.2μm濾膜，濾液供液相色譜-串聯質譜測定。
（3）測定
①色譜條件
色譜柱：Zorbax XDB C18柱（150mm×2.1mm×5μm）或相當者。
柱溫：35℃。
進樣量：40μL。
流動相及流速。
②質譜條件
離子源：電噴霧離子源（ESI）。
掃描方式：正離子掃描。
檢測方式：多反應監測（MRM）。
霧化氣（NEB）、氣簾氣（CUR）、輔助加熱氣（AUX）、碰撞氣（CAD）：均為高純氮氣，使用前應調節各氣體流量以使質譜靈敏度達到檢測要求。
噴霧電壓、去集簇電壓、碰撞能等：電壓值應優化至最優靈敏度。
Q1，Q3：均為單位分辨率（UNIT）。
③定性測定：
在相同試驗條件下，樣品中待測物與同時檢測的標準物質具有相同的保留時間，並且非定量離子對與定量離子對色譜峰麵積的比值相對偏差小於30%，則可判定為樣品中存在該殘留。
④定量測定：
按照液相色譜-串聯質譜條件測定樣品和混合標準工作溶液，以色譜峰麵積按內標法定量，以AMOZ-D5（m/z 340/296）計算AMOZ（m/z 335/291）的濃度，以SCA-13C-15N2（m/z 212/195）計算SEM（m/z 209/166）的濃度，以AHD-D3（m/z 252/134）計算AHD（m/z 249/134）的濃度，以AOZ-D4（m/z 240/134）計算AOZ（m/z 236/134）的濃度。
⑤空白試驗：除不加試樣外，均按上述測定步驟進行。
5.計算
本方法檢測限：呋喃它酮代謝物、呋喃西林代謝物、呋喃妥因代謝物和呋喃唑酮代謝物的檢測限均為0.50μg/kg。
本方法準確度：在0.50～10.0μg/kg添加濃度的回收率均大於70%。
本方法精密度：相對標準偏差RSD小於15%。
九、畜禽肉中氯黴素的測定
1.原理
試樣中殘留的氯黴素經乙酸乙酯提取後，經減壓濃縮，用0.5mol/L HClO4溶液溶解殘渣，用正己烷去除脂肪，經微孔濾膜過濾後，濾液供高效液相色譜分析。
2.試劑
（1）水：超純水（電阻率≥18.2MΩ）。
（2）甲醇:色譜純。
（3）氯黴素：每毫克相當994單位，含量99%。
（4）氯黴素標準貯備液：精確稱取0.010g氯黴素標準品，置於100mL容量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻。此溶液濃度為0.10mg/mL，置於冰箱中保存，有效期3個月。
（5）氯黴素標準工作液：精確吸取5.0mL貯備液於50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。此溶液濃度為10pg/mL，置於冰箱保存。有效期半個月。臨用前取此液用0.5mol/L HClO4溶液稀釋成適當濃度的標準工作液。
3.儀器
高效液相色譜儀(配紫外檢測器)；旋轉蒸發儀；渦流混勻器；超聲波發生器；旋轉蒸發儀；微孔濾膜過濾。
4.檢驗方法
（1）提取
取200g試樣絞碎，稱取20g(精確至0.01g)絞碎後的試樣，置於100mL具塞三角瓶中，加入40mL乙酸乙醋，振搖，超聲提取30min，過濾，濾液放於另一三角瓶中。再加入20mL乙酸乙酯於試樣中，超聲提取15min，過濾，濾液合並，濾渣再加20mL乙酸乙酯超聲提取15min，過濾，濾液合並，全部濾液合並轉入濃縮瓶中。
（2）淨化
將合並的濾液於52℃～55℃水浴旋轉蒸發儀上濃縮至幹。精確加入1.0mL 0.5mol/L HClO4溶液洗滌濃縮瓶中殘留物，再加入1mL正己烷，振搖1min,將全部溶液轉移至5mL試管中，靜置分層，吸棄正己烷層，再加入2mL正己烷提取脂肪，再吸棄正己烷層，用高氯酸溶液過0.45pm濾膜，濾液供高效液相色譜測定。
（3）測定
①液相色譜參考條件
色譜柱:HypersilO DS2 250mm×4.6mm,粒徑5pm。
流動相:甲醇+水=45+55。
流速:1.0mL/min。
檢測波長:280nm。
柱溫:室溫。
進樣量：20μL。
②氯黴素標準曲線的製備：依照上述色譜條件，分別注入標準工作液各點。每個標準液進20μL測定其峰麵積，然後以標準液濃度對峰麵積作校準曲線，求出回歸方程及相關係數。
③樣品的測定：在上述色譜條件下，吸取已淨化的樣品溶液20μL，進行HPLC分析。
5.計算
精密度：同一分析者同時或相繼兩次測定結果之差不得超過均值的15%。