一、實訓目標
（1）了解高效液相色譜儀的結構和工作原理。
（2）熟悉高效液相色譜儀的使用方法。
二、實訓原理
1.儀器結構
高效液相色譜儀由高壓輸液係統、進樣係統、分離係統、檢測係統、記錄係統五大部分組成。
2.工作原理
分析前，選擇適當的色譜柱和流動相，開泵，衝洗柱子，待柱子達到平衡而且基線平直後，用微量注射器把樣品注入進樣口，流動相把試樣帶入色譜柱進行分離，分離後的組分依次流入檢測器的流通池，檢測器把組分濃度轉變成電信號，經過放大，記錄器記錄下來就得到色譜圖。其色譜圖是定性、定量和評價柱效高低的依據。
三、主要儀器及試劑
儀器:高效液相色譜儀。
試劑:諾氟沙星對照品、磷酸、乙腈、鹽酸。
四、實訓內容與步驟
1.操作前準備
（1）流動相的製備配製1000mL流動相：精密量取磷酸0.87g置870mL重蒸水中，精密調節pH為3.0，加乙腈130mL，混勻後，以0.45μm有機型濾膜過濾除去雜質備用。
（2）對照溶液的配製精密稱取諾氟沙星對照品25mg，置100mL容量瓶中，加0.1mol／L鹽酸溶液2mL使溶解後，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取5mL，置50mL容量瓶中，搖勻，即得。
（3）供試溶液的配製取裝量差異項下的內容物，混勻，精密稱取細粉適量（約相當於諾氟沙星125mg），置500mL量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液10mL使溶解後，用水稀釋至刻度，搖勻，過濾，精密量取續濾液5mL，置50mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。
（4）檢查儀器選擇合適的色譜柱安裝，注意色譜柱進出口位置是否與流動相的流向一致，原保存溶劑與現用流動相能否互溶，儀器是否完好，儀器的各開關位置是否處於關斷的位置。
2.泵的操作
（1）將配好的流動相、臨用新濾的水、甲醇、乙腈，分置A、B、C、D四個溶劑瓶中，濾器浸入溶劑，依次打開泵、工作站。
（2）由工作站界麵啟動泵，打開泵的排液閥，用衝洗鍵分別對四個通道進行衝液排氣，注意同時衝洗自動進樣器。
（3）將流速調節至1.0mL/min，首先將B通道（水）調節為100%，過柱約20min後，調節A通道（流動相）為100%，即以標準規定比例的流動相開始過柱平衡，時間一般為30min。
3.紫外-可見檢測器的操作
流動相平衡期間，打開氘燈，設定所需波長278nm，待燈預熱穩定後開始檢測基線。
4.進樣操作
（1）將對照溶液、供試溶液分置進樣瓶中，放入進樣托盤中，待基線平衡後，在工作站界麵單擊進樣圖標，設置進樣瓶號、進樣量、文件名、文件保存途徑等，確認後儀器自動進樣。