1931年8月30日，上海發來了一份12000多字的《中央給蘇區中央局並紅軍總前委的指示信》。根據這份指示信的精神，11月1日至5日，中國共產黨中央蘇區第一次代表大會(即“贛南會議”)在瑞金縣的葉坪召開。會議由中央代表團主持，毛澤東代表蘇區中央局向大會作了報告。會議通過了關於政治、紅軍、黨的建設、青年團工作和蘇區工運等五項決議案。這五項決議案實際上是8月30日指示信的翻版和具體化。這次會議及決議案從幾個方麵對毛澤東進行不正確的批評。指責他極嚴重的錯誤就是“缺乏明確的階級路線和充分的群眾工作”；指責他實行的“抽多補少”、“抽肥補瘦”、按人口平均分配土地的正確政策，是“富農路線”，是犯了“向地主豪紳及富農讓步的右傾機會主義錯誤”；指責他為紅軍製定的一整套正確的戰略戰術，是“狹隘的經驗論”、“完全是農民的落後思想”；指責他肅反上“有很大錯誤”等等。會議最後決定撤銷毛澤東蘇區中央局代理書記職務，同時，會議還決定撤銷紅一方麵軍總部機構的建製，這就在實際上也撤銷了毛澤東紅一方麵軍總前委書記和總政委的職務。但是，以毛澤東為代表的正確路線，在中央革命根據地早已深入人心，並在長期的鬥爭實踐中培養了一大批執行這一路線的優秀幹部，也具備雄厚的群眾基礎。因此，要想在中央根據地完全否定毛澤東的正確路線和全麵貫徹王明的錯誤路線，勢必遭到抵製和反對。所以這次會議後，以毛澤東為代表的馬克思主義路線同以王明為代表“左”傾教條主義路線，便直接地、正麵地展開了長期的、艱苦的和曲折而複雜的鬥爭。
1932年5月，蔣介石自任鄂豫皖三省“剿匪”總司令，調集大批軍隊向革命根據地發動第四次“圍剿”。從1932年7月到1933年3月，蔣介石采取兩步走的戰略部署，先進攻鄂豫皖、湘鄂西革命根據地，準備得手之後，再全力進攻中央革命根據地。
在這種緊急的形勢下，周恩來以蘇區中央局書記身份同朱德、王稼祥聯名致電中央局提議毛澤東任總政委。周恩來於7月29日再寫信給瑞金中央局，再次陳述由毛澤東擔任總政委的理由：“澤東的經驗與長處，還須盡量使他發展”，“有澤東負責，可能指揮適宜”。8月8日，中央局同意了周恩來等人的建議，任命毛澤東為紅一方麵軍總政治委員，同時決定在前方由周恩來、毛澤東、朱德、王稼祥組成最高軍事會議，以周恩來為主席，負責處理前方的行動方針與作戰計劃。這樣，毛澤東以紅一方麵軍總政委和最高軍事會議成員的身份參與軍隊指揮，又回到前線。但是，無論在戰略原則上，還是在各個具體部署上，在前線指揮作戰的領導人周恩來、毛澤東、朱德、王稼祥同在後方中央局的領導人任弼時、項英、鄧發、顧作霖之間的原則分歧都是非常尖銳的。正是在這樣的情況下，準備召開會議來解決問題。
1932年10月上旬，中共蘇區中央局在寧都召開會議。這次會議是為了貫徹執行臨時中央的“左”傾冒險主義的進攻路線，並討論如何應敵的問題。“左”傾冒險主義路線的執行者，對毛澤東進行了更激烈的批評和指責。他們指責毛澤東在二三月間曾反對紅軍攻打贛州等中心城市。在贛州戰役失利後，又指責他不讚成向奪取贛江流域中心城市方麵發展的這些正確主張是對“奪取中心城市”方針的“消極怠工”，是“純粹防禦路線”，並且把在曆次反“圍剿”中行之有效的“誘敵深入”的戰略方針，也指責為“專去等待敵人進攻的右傾主要危險”。會議要求紅軍在敵軍合圍未成之前主動出擊，以奪取中心城市，爭取江西首先勝利，完全否定了毛澤東的主張。在紅軍的組織領導機構上，寧都會議決定取消過去的前線最高軍事會議製度。會議無視周恩來提議讓毛澤東留在前線指揮作戰的意見，不顧王稼祥、朱德的反對，排擠毛澤東對紅軍的領導。會上曾決定“毛澤東在前方‘助理’。”但會後，“左”傾領導者調毛澤東專做政府工作。會後，周恩來專程探望毛澤東。毛澤東誠懇地表示：當前方需要我的時候，打個招呼我就來。1932年10月12日，中央軍委發出通令說：“工農紅軍第一方麵軍總政治委員會毛澤東同誌，為了蘇維埃工作的需要，暫回中央政府主持一切工作。所遺總政治委員一職，由周恩來代理。”
10月26日，中共臨時中央正式任命周恩來兼紅一方麵軍總政委。至此，終於又一次撤銷了毛澤東紅軍總政委的職務，並完全剝奪了毛澤東對紅軍的領導權。從此，直到遵義會議之前，再也沒有讓毛澤東回到前方。寧都會議後不久，1933年1月，中共臨時中央政治局，因在上海無法立足，被迫遷入中央革命根據地的瑞金。他們為了推行“左”的政策，繼續反對以毛澤東為代表的正確主張，作出《關於閩粵贛省委的決定》，指責福建省委“形成了以羅明同誌為首的機會主義路線”，隨即在福建開展反對所謂“羅明路線”的鬥爭。3月，又召開了江西省會昌、尋鄔、安遠三縣黨的積極分子會議，認為堅持毛澤東正確主張的鄧小平等執行了所謂“純粹的防禦路線”，開始反對以鄧小平、毛澤覃、謝唯俊、古柏為代表的所謂“江西羅明路線”的鬥爭。接著將鄧小平、毛澤覃、謝唯俊、古柏四人派往農村或撤職。這兩次鬥爭，矛頭自然是對著毛澤東的。正如後來羅明回憶說：“王明一夥反所謂‘羅明路線’，實際上就是反對毛主席的革命路線”，“他們不敢公開反對毛主席，因為毛主席威望高，就拿我開刀。”