一、微生物總數快速測定儀微生物總數快速測定儀(又名ATP熒光儀)是專門設計用於快速檢測微生物數量的測定儀器。它簡單實用，能快速和方便的測定微生物的增長水平，及時采取有效措施控製微生物的繁殖，這樣就可以防止由於微生物大量繁殖而引發的一係列問題。
ATP-蟲熒光素酶發光體係通過分析從微生物中提取的ATP,可在數分鍾內檢測出微生物的數量，是一種簡便而靈敏的方法。近幾年來,這一技術在發達國家已越來越多地用於微生物快速檢測。國內在這方麵的研究報道較少,更沒有廣泛地應用。其主要原因在於對這一技術的具體方法缺乏研究,在應用中用了不恰當的萃取劑和不合適的微生物ATP萃取方法,致使檢測結果不理想,從而放棄使用這一技術進行微生物快速檢測分析。通過對ATP-蟲熒光素酶發光技術中非微生物ATP的清除方法和微生物ATP萃取方法的研究，發現利用ATP-蟲熒光素酶發光技術快速檢測微生物時,必須對非微生物ATP進行有選擇地萃取和水解,同時必須選擇合適的微生物ATP萃取劑和萃取方法，否則可能得出錯誤的結果。
（一）原理
ATP(Adenosine Triphosphate)即三磷酸腺苷，是一種存在於所有的活細胞體內的化學物質，它是微生物能量的主要載體。ATP的量和活細胞體的活性、種類和數量呈一定的比例關係。ATP可以和蟲熒光素相互作用而發出生物光，光的強度和微生物的數量呈一定的比例關係。通過檢測生物光的強度可反映出微生物的數量。ATP為代謝提供能量來源,是微生物不可缺少的物質。如果樣品中汙染了微生物,用有機溶劑等專用試劑使菌裂解後,ATP被釋放出來。利用ＡＴＰ-熒光反應可測出ATP的含量。發光儀可讀出發光量,再通過配套的軟件,可將發光量換算成微生物數。
(二)微生物總數快速測定儀的特點
該儀器可在1min內完成檢測，得出結果，可測定好氧菌、鐵細菌、氮硝化細菌、軍團菌、硫酸鹽還原菌、酵母菌、藻類。
（三）結構組成
該儀器包括樣品過濾膜、ATP-生物熒光反應器、熒光增強及數據處理係統。將整個待測樣品用600孔疏水分隔的過濾膜過濾,而後，將膜溫育一段時間（檢測酵母時可不經溫育直接檢測）,向膜上噴上溶菌試劑,再向膜上噴熒光素熒光素酶。理論上說,每個菌落都會形成一個熒光斑。熒光增強係統則將每個微菌落發出的熒光，進行成千倍的增強並用偶聯的照相機記錄下熒光圖像。而後,自動圖像處理器會分析熒光強度等數據並由此計算出微生物的數量。附帶的軟件會記錄圖像和數據,存檔以待進一步的分析。
（四）操作步驟
(1)非微生物ATP的清除取1mL樣液,加入不同濃度的TritonX-100和apyrase(Sigma Chemical Co.)混合液1mL,在室溫下放置10min。
(2)指示菌ＡＴＰ的提取采用氯仿釋放法提取ATP。在每支經5h孵育的指示菌測試管中,加入1mL細菌懸液,每支測試管再加入0.3mL氯仿試劑,置沸水浴中煮沸8min,並不斷振搖,煮沸結束後立即在冷水中冷卻,離心沉澱。本底測定管用同樣的方法同時處理。
(3)生物發光(Bioluminescene,BL)的測定取0.2mL ATP提取液置於ＢＣ測定管中,在ＴＤ 4000發光光度計內測定ＢＬ發光峰值(ＣＰＳ)。測定參數:溫度25℃,時程10s,蟲熒光素-熒光素酶試劑0.1mL。
(4)結果判定根據本底管ＢＬ峰植ＣＰＳ進行判定。
（五）特點
(1)靈敏度高采用ATP-熒光法對ATP的檢出下限可達picomol級。直接檢測微生物的檢出下限為104cfu/mL。為提高靈敏度,在測定熒光前必須將樣品溫育以使微生物增殖一段時間（15min～24h不等,要依據樣品和測量儀器的情況而定）。理論上說經過溫育靈敏度可提高到數個cfu/mL。