h2——標準溶液的峰高
D——樣品的總稀釋倍數
（四）麵粉中過氧化苯甲酰的測定
1．原理
樣品中過氧化苯甲酰用無水乙醇提取，然後還原成苯甲酸，進HPLC係統分離測定，以保留時間定性，峰麵積定量。
2．試劑
無水乙醇、鹽酸羥胺溶液為分析純。
過氧化苯甲酰標準使用液：稱取過氧化苯甲酰0.0500g，用無水乙醇溶解後，轉移入10.0mL容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻。再吸取此液1.0mL於10.0mL容量瓶中，加無水乙醇至刻度，搖勻，即得0.05mg/mL的過氧化苯甲酰標準使用溶液。
3．儀器
高效液相色譜儀，紫外檢測器。
4．測定方法
（1）樣品處理稱取10.00g樣品，置50mL比色管中，加20mL無水乙醇，劇烈振搖5min，放置過夜，再振搖混勻30s，待分層後，用濾紙過濾，取濾液5mL，加5mL 5%鹽酸羥胺溶液反複混合，室溫下放置10min並不斷混合，然後過0.5μm濾膜，注入HPLC係統進行測定。
（2）高效液相色譜參考條件
①色譜柱：C18 10μm，4mm(id)×250mm不鏽鋼柱。
②紫外檢測器：波長230nm。
③流動相：甲醇+0.02mol/L乙醇胺溶液(1+9)。
④流速：1mL/min。
⑤進樣量：20μL。
二、HPLC技術在食品安全檢測中的應用
HPLC可以測定食品中殘留的農藥、抗生素、殺蟲劑、重金屬以及黴菌毒素等汙染物。
食品中的黃曲黴毒素、赭曲黴毒素、黃杆菌毒素、大腸杆菌毒素等黴菌毒素，都具有熒光，HPLC測定時都采用熒光檢測器，具有快速、簡便、靈敏等優點。
（一）食品中蘇丹紅1、2、3、4號的檢測
1．原理
樣品經處理後，直接進入高效液相色譜儀分析，以保留時間定性，峰麵積定量。
2.試劑
乙腈（HPLC級）、正己烷、氯化鈉、超純水。
3.儀器
高效液相色譜儀，紫外檢測器，N2000色譜數據工作站，超聲波清洗器，渦旋振蕩儀，真空旋轉蒸發儀。
4.測定方法
（1）樣品處理稱取辣椒樣品5g置於150mL三角瓶中，加入50mL乙腈，充分攪拌均勻，超聲30min，再加入10g氯化鈉，攪拌均勻後離心（4000r/min，10min）。取一半上清液旋轉蒸發至幹，殘渣加入2mL流動相和5mL正己烷，渦旋混合後離心（4000r/min，5min），棄去上層正己烷層，下層定容至3mL，過0.45μm的濾膜上機檢測。
（2）高效液相色譜參考條件
①蘇丹紅1號：
a.色譜柱：Waters 5C18-MS-Ⅱ柱(5μm，4.6mm×250mm)，室溫。
b.流動相：乙腈—水（90/10，體積比），流速1.0mL/min，使用前需用超聲波脫氣處理。
c.檢測波長：478nm。
②蘇丹紅2、3、4號：采用梯度洗脫和變波長的方法
a.色譜柱：Venuses XBP-C18柱（5μm，4.6mm×150mm）。
b.流動相：溶劑A（0.1％甲酸水溶液/乙腈＝85/15），溶劑B（0.1％甲酸的乙腈溶液/丙酮＝80/20）。
c.梯度洗脫：流速1mL/min。
d.檢測波長：520nm。
蘇丹紅1、2、3、4號同時進樣，12min後自動切換波長。
（3）測定點進樣品提取液20μL。並同時進入蘇丹紅1號品的標準溶液，與標準比較。
（二）乳品中涕滅威的測定
1．原理
涕滅威是N-甲基氨基甲酸酯類農藥，它是具有殺蟲活性的氨基甲酸酯類農藥的主要品種。隨著在農業上使用量增加，動物性食品中的殘留量問題受到重視。本方法采用一步提取分離，結合凝膠淨化，用高效液相色譜法檢測，以出峰時間定性、峰高定量。
2．試劑
甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、環己烷均為分析純，需重蒸；氯化鈉、無水硫酸鈉用分析純；涕滅威、速滅威、西維因、異丙威、呋喃丹純度均大於99%；BiO-Beads S-X3，200～400目。
涕滅威、速滅威、西維因、異丙威、呋喃丹等5種農藥混合標準液：將此5種農藥分別以甲醇配成一定濃度的儲備液。混合標準應用液中，5種農藥的質量濃度分別為：涕滅威5mg/L，速滅威10mg/L，呋喃丹10mg/L，西維因1.5mg/L，異丙威10mg/L。
3．儀器
高效液相色譜儀，紫外檢測器，旋轉蒸發儀，凝膠淨化柱，（長30cm，內徑2.5cm），帶活塞玻璃層析柱，柱底填少量玻璃棉，用乙酸乙酯+環己烷（1+1）浸泡過夜的凝膠以濕法裝入柱中，柱中膠床高約26cm，膠床始終保持在洗脫劑中。
4．測定方法
（1）樣品提取與純化稱取乳品20g於100mL具塞三角瓶中。加40mL丙酮，振搖30min，加入6g NaCl，振搖15min，再加入30mL CH2Cl2，振搖45min。取50mL上清液，經無水Na2SO4濾於旋轉蒸發瓶中，濃縮至約1mL，加2mL乙酸乙酯+環己烷（1+1）溶液再濃縮，如此重複3次，濃縮至約1mL。上凝膠柱淨化，棄去35mL流出液後，收集30mL。轉入旋轉蒸發器濃縮至約1mL，加5mL甲醇再濃縮，重複2次，將濃縮液移入5mL刻度試管中，用甲醇洗蒸發瓶數次，並入該試管中。用氮氣吹至1mL左右，定容至1mL，此液留作HPLC分析用。
（2）高效液相參考條件
①色譜柱：ODS柱，4.6mm×250mm。
②流動相：甲醇+水（45+55）。
③流速：0.5mL/min。
④測定波長：210nm。
（3）測定將儀器調至最佳條件後，首先作標準曲線，然後測定樣品，外標法定量。
5．結果計算
x=（ρ×V1/V2×1000)/m
式中x——樣品中涕滅威的含量，μg/kg
ρ——被測液中涕滅威的含量，μg/mL
V1——樣品定容體積，mL
V2——用作測定液的體積
m——樣品質量，g
6．其他
本方法可以同時測定涕滅威、速滅威、呋喃丹、西維因、異丙威5種N-氨基甲酸酯類農藥。5種農藥的標準曲線線性關係良好（r=0.9944～0.9963），5種農藥的檢測限（μg/kg）分別為涕滅威12.5，速滅威15，呋喃丹，西維因3.8，異丙威15。按規定的色譜條件，5種農藥的出峰時間從16min開始，在35min內結束，保留時間偏差不超過0.5min
。
（三）禽肉組織中四環素、土黴素和氯黴素等抗生素殘留量的測定
1．原理
動物組織內抗生素殘留量超過一定的量，會影響食用者的健康。本方法采用EDTA+磷酸（1+1）-三氯乙酸提取法，並用C18固相柱富集、淨化，取得比較好的分離效果，以峰保留時間定性、以峰麵積定量。
2．試劑
甲醇為優級純；乙腈為色譜純；三氯乙酸、磷酸、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、EDTA二鈉均為分析純；四環素標準品、氯黴素標準品均由中國藥品生物製品檢定所提供。
四環素、土黴素、氯黴素標準貯備液：分別精確稱取0.1000g四環素、土黴素、氯黴素標準品，各放入100mL棕色瓶中，用甲醇溶解，並稀釋至刻度（相當於1g/L），在冰箱內保存，此三種標準貯備液均可穩定1個月。
流動相緩衝液
①A液（測四環素類用）：稱取3.582g磷酸氫二鈉於1L燒杯中，加蒸餾水溶解並稀釋到約600mL，用1mL磷酸滴定至pH 2.5，加入0.375g EDTA二鈉，攪拌溶解，定量轉移至1L容量瓶中，並用蒸餾水稀釋至1L，過0.45μm濾膜，備用。
②B液（測氯黴素用）：稱取7.800g磷酸二氫鈉於1L燒杯中，加蒸餾水溶解並稀釋到約600mL，用1mL磷酸滴定至pH 2.5，定量轉移至1L容量瓶中，並用蒸餾水稀釋至刻度，過0.45μm濾膜，備用。
③EDTA磷酸提取液：0.01mo1/L EDTA二鈉溶液和0.04mo1/L H3PO4溶液在使用前等量混合（不宜久放，否則會析出沉澱）。