【知識目標】了解孢子分離法；熟悉大型子實體組織分離的方法；了解基內菌絲分離法；分析分離接種的結果。
【技能目標】能做好組織分離前的準備工作；能夠熟練的進行大型子實體的組織分離；會提純。
【德育目標】具有良好的職業道德和職業素質；愛崗敬業；愛護儀器設備；對待工作，精益求精，一絲不苟。
【生產任務】
采用組織分離法分離菌種。
1實施任務的條件
接種箱或超淨工作台、手術剪刀、尖頭鑷子、普通鑷子、培養皿（大、中、小3～5隻/箱，用於盛放子實體、點燃消毒藥）、燒杯（中、小3～5隻/箱，用於盛放廢物、衝洗種菇等）、吸水紙、酒精棉球、火柴、酒精燈、記號筆、口取紙、種菇、空白斜麵培養基、甲醛、高錳酸鉀（或氣霧消毒劑）等。
2實施任務
組織分離的工藝流程：種菇的選擇→接種環境的處理→移取組織塊→接種培養→轉管純化。
2.1種菇的選擇
種菇應選擇頭潮菇、外觀典型、大小適中、菌肉肥厚、顏色正常、尚未散孢、無病蟲害的優質單朵菇。
2.2接種環境的處理
先用2%來蘇兒清潔接種箱內外，放入種菇及分離菌種所需的物品，用甲醛熏蒸。每立方米空間一般用甲醛10mL，加5～7g高錳酸鉀，使甲醛氧化揮發。先將高錳酸鉀放入接種箱內的容器中，再注入甲醛，立即產生強烈刺激的甲醛氣體。熏蒸時間至少保持30min以上。或用食用菌專用氣霧劑熏蒸30min左右。
如用超淨工作台接種，可用消毒液擦拭台麵後放置接種所需物品，開啟紫外燈及風機，照射20min後使用。
2.3移取組織塊
先將種菇消毒，在接種箱內或超淨工作台的無菌區，用鑷子夾著燃燒的酒精棉球迅速擦拭菇體。
（1）大型子實體如香菇、平菇等將菇體撕開，用無菌尖頭鑷在柄蓋交界處取綠豆粒大組織。
（2）中、小型子實體如金針菇等采用生長點組織分離法。即用長柄鑷子快速擊去菌蓋，用鑷子尖取下菌柄尖端的生長點。
（3）膠質菌類如黑木耳一種方法是反複衝洗耳片，最後剪成0.5cm×0.5cm的小塊，置於斜麵培養基中培養；另一種方法是取尚未完全伸展的膠質耳基團，切取中央無菌組織進行分離培養。後一種方法汙染率較低。
2.4接種培養
將移取的組織塊迅速接種到試管斜麵培養基中央，塞好棉塞，貼好標簽，將個別組織塊接種位置偏離的試管調整好，每10支1捆，置於25℃左右的恒溫培養箱中培養。培養期間每天都要檢查菌種的萌發與生長情況，尤其是前三天，及時挑出汙染的試管。
2.5轉管與純化
組織分離得到菌種後，再轉到新的斜麵培養基上，並認真觀察菌絲萌發情況。在菌絲團直徑接近1cm時，挑選色澤純、健壯、長勢正常、無間斷的菌絲，在接種箱或超淨工作台內，用接種針將菌絲的前端移接到新的試管培養基上。在23～25℃的恒溫條件下，培養7～10d，待菌絲長滿管後，再進行觀察，從中擇優取用。
3歸納總結
3.1采用組織分離法應注意的問題
組織分離是采用食用菌子實體或菌核、菌索的任何一部分組織，培養成純菌絲體的方法。盡管子實體的任何一部分都能分離培養出菌種，但多年的實踐經驗表明，用菌柄與菌褶交界處的菌肉最好，因其新生菌絲發育健壯、活力強，不易被雜菌汙染。組織分離法操作簡便，菌絲生長發育快，品種特性易保存下來，特別是雜交育種後，優良菌株用組織分離法能使遺傳特性穩定下來。
分離選育的母種，還必須進行出菇試驗。出菇采用小規模試驗。方法是把母種接種於瓶（袋）的培養基上，根據各種菇（耳）種性對溫度的要求，進行適溫培養，觀察菌絲生長速度、吃料能力、菌絲形態特征、生理生態特性；菌絲長滿後，移到出菇最適條件下，觀察出菇速度、菇體特征、產量、質量等，選擇高產、優質的母種，用於擴大培養。