【知識目標】了解母種培養基的種類；熟悉母種常用的培養基製備方法及操作注意事項；知道母種擴培的工藝流程；知道接種與培養環境的消毒滅菌方法；知道無菌操作規程。
【技能目標】會製作PDA、加富PDA培養基；能運用高壓滅菌鍋進行培養基滅菌；能進行物體表麵消毒；會無菌操作；能進行母種的擴大培養。
【德育目標】培養學生嚴格遵守操作規程的良好習慣和科學嚴謹的工作作風；具備協作能力和質量意識。
【生產任務】
擴培100支試管母種。
1任務實施的條件
1.1材料
馬鈴薯200g、葡萄糖（或蔗糖）20g、瓊脂20g、水1000mL，香菇母種。
1.2儀器用具及消毒藥品
儀器用具：電爐子、鋁鍋、玻璃棒、漏鬥、紗布、止水夾、漏鬥架、切菜小刀、切板、1000mL燒杯、捆紮繩、棉花、試管（18mm×180mm）100支、試管架、鐵絲筐、1.5cm厚的長木條、標簽、天平、稱量紙、牛角匙、精密pH試紙、牛皮紙、皮筋、紗布、恒溫培養箱、手提式高壓滅菌鍋、超淨工作台或接種箱、接種鏟、酒精燈、火柴、記號筆、口取紙等。
消毒藥品包括：75％酒精棉球、0.25%新潔爾滅溶液、氣霧消毒劑。
2確定配方
母種培養基的配方很多，最常用的是PDA培養基。此外，各地的科研工作者和有經驗的生產人員通過不斷探索，設計出許多培養基配方，生產者可根據具體情況酌情選擇。
3任務實施
母種的製作過程：培養基的配製→培養基的滅菌→擺斜麵→轉管→培養→再生母種。
3.1母種培養基的配製
3.1.1製備營養液
按照選定的培養基配方，計算各種成分的用量，用天平稱取各種物質。
（1）煮汁取濾液將馬鈴薯洗淨，去皮去芽眼，準確稱量200g，然後把馬鈴薯切成1cm見方的小塊或2～3mm厚的薄片後放在小鋁鍋內，加水1000mL，煮沸，再用文火保持20～30min，並適當攪拌，使營養物質充分溶解出來，然後用4層預濕過的紗布過濾，取其濾液。
（2）補足水量，加藥品溶化補足水量至1000mL，然後往濾液中加入瓊脂，小火加熱，攪拌至瓊脂完全溶解，再加入葡萄糖和其他營養物質使其溶化。注意開鍋後要適當攪拌並減小火力，防止溢出或焦底。
3.1.2營養液分裝
製備好的培養基應趁熱分裝。首先把較大的玻璃漏鬥固定在滴定架上，下接一段乳膠管和玻璃管，用彈簧夾夾住膠管。分裝時，把熱的培養基倒入漏鬥中，餘下的置電爐上保溫；然後左手持3～6支試管，讓玻璃管和乳膠管伸到試管的中下部，右手用彈簧夾控製培養基流量，分裝量掌握在試管長度的1/4～1/5。也可用注射器定量分裝。
注意分裝時，培養基不能沾在試管口壁上，否則會汙染棉塞。如有應及時清理幹淨，培養基凝固前立放。
3.1.3塞棉塞
棉塞需用纖維較長的普通棉花製作，勿用易吸潮的脫脂棉。棉塞必須與容器口密切貼合，有適宜的鬆緊度。太鬆過濾性差，太緊又會降低通氣性；過粗大不利於拔取和堵塞，而過細又易進入雜菌甚至脫落。一般要求棉塞長度約3～5cm，塞進2/3，外留的1/3是棉塞的頭部，應略粗大。鬆緊度以手提棉塞輕輕下甩試管不脫落，而棉塞拔出時有輕微響聲為宜。
卷棉塞的方法中的兩種卷法。若不包紗布可將其直接塞入試管口。若包紗布須將一小塊紗布蓋在棉塞上，拇指和食指隻捏住棉花卷向試管內塞入，順便就會把紗布頂進去，把管口外的棉花收緊、捏圓，再將外圍的紗布整理好後用線繩紮口，最後剪掉剩餘的紗布和線繩。包紗布的棉塞利於無菌操作，不易被酒精燈點燃，還可以重複使用。
3.1.4捆紮
10支試管為1捆，試管上端用兩層報紙或用一層牛皮紙包住2/3，用繩紮好，待滅菌。
3.2滅菌
培養基滅菌采用高壓蒸汽滅菌方法。
3.3擺斜麵
將試管培養基趁熱斜置於木板條上，斜麵的長度為試管長度的1/2～2/3，若環境溫度低可蓋毛巾，以免形成過多的冷凝水。
3.4母種擴培
斜麵母種的擴大培養，稱為繼代培養，俗稱轉管。無論引進或自己分離的母種，都需要適當傳代，使之產生大量再生母種，才能源源不斷供應生產。再生母種的生活力常隨轉代次數的增加而降低，一般傳代5次以後就換分離法。接種是食用菌製種工作中一項最基本的操作，無論是菌種的轉代、分離、鑒定，還是進行食用菌形態、生理、生化等方麵的研究都離不開接種操作。為了保證菌種純淨無汙染，必須在無菌接種箱內或超淨工作台上操作。
3.4.1接種物品準備
將試管母種（用報紙包好，避免紫外線照射）、空白斜麵培養基、酒精燈、火柴、75%酒精棉球、口取紙、記號筆、接種用具等先放入接種箱中或超淨工作台上。
3.4.2接種設備預處理
接種前將接種箱用氣霧消毒劑熏蒸30min；超淨工作台在接種操作前30min開啟紫外線燈（在進入操作之前10min應先關掉紫外線燈），20min前開啟風機，保證無菌操作。
3.4.3接種前表麵消毒、燒灼滅菌
（1）將手用75％的酒精棉球擦拭後伸入接種箱或超淨工作台，再擦菌種試管外壁和接種工具，進行表麵消毒後，點燃酒精燈，使火焰周圍的空間成為無菌區，接種操作在火焰旁進行，避免雜菌汙染。
（2）右手拿接種鉤，在火焰上將接種鉤頂端燒紅滅菌。凡在接種過程中可能進入試管的部分，全部用火灼燒。
3.4.4移接菌種
（1）先將棉塞用右手擰轉鬆動，以便接種時拔出。
（2）將母種和空白斜麵培養基用大拇指和其他四指握在左手中，斜麵向上，並使它們與桌麵接近水平，試管口略向下傾斜。
（3）用右手同時拔掉兩個試管的棉塞，不得亂放。
（4）以火焰燒灼管口，燒灼時應不斷轉動試管口（靠手腕動作），以殺滅試管口可能沾染上的雜菌。
（5）將燒灼過的接種鉤伸入母種試管內，停留片刻讓其冷卻，以免燙傷菌絲。然後，輕輕挑取菌絲少許，迅速將接種鉤抽出試管（注意不要使接種鉤碰到管壁），移接到空白斜麵培養基中央，讓生菌絲朝上。注意不要把培養基劃破，也不要使菌種沾在管壁上。抽出接種鉤，燒灼管口，棉塞燎烤至微焦，在火焰旁塞上棉塞。再換接另一支空白斜麵培養基。重複上述操作，直至原始種用完。一般一支試管母種可轉接30～40支試管。
3.4.5貼標簽
貼標簽是製種上一道十分重要的工序。無論是菌種分離還是一級、二級、三級種的擴大繁殖，無菌操作後應馬上貼上標簽。一級種標簽應貼在試管前端，既不遮住棉塞，又不遮住培養基斜麵的部位，以免在檢查棉塞和斜麵是否汙染時造成不便。
菌種名多寫在標簽的第一行，字體較大；菌株號一般要求用較小號的字符寫在菌種之後；接種者或接種單位，多寫在第二行開頭，字體宜小；接種日期寫在第二行接種者或單位之後，字體同樣宜小。
3.4.6培養
結束接種後，蓋滅酒精燈，清理接種箱或超淨工作台，將接種鏟及一切用具擺放整齊。用紙包紮試管上部，10支1捆，放入培養箱內培養。母種培養的常用設備為電熱恒溫培養箱，或在可調溫的培養室內進行。培養溫度等條件應根據生產的品種而具體設定和調控，一般平菇、雞腿菇、金針菇、白靈菇等品種應調至25℃左右，草菇應調至28℃以上。空氣相對濕度應保持在60％左右，同時避光並保持空氣新鮮，從而使菌絲生長健壯。
母種培養期間要經常檢查，及時揀出不良個體。從培養的第二天開始，每天檢查一次，主要檢查兩個方麵，一是有無汙染，二是菌絲生長是否正常，包括形態、長速、活力、均勻度等。若在遠離接種塊的培養基表麵出現獨立的奶油狀小點，或與種源菌絲不同的紅、黃、綠、黑、灰等現象即為汙染，應立即淘汰，並作相應的殺菌工作，以防雜菌擴散。如果間隔時間過長才檢查，雜菌菌落可能會被旺盛生長的食用菌菌絲所掩蓋，一旦用於生產，會帶來很大損失。母種經過7～10d即可長滿培養基，然後用於進一步擴大繁殖或置4℃冰箱中冷藏備用。