(五)胎仔檢查
1.吸收胎、死胎和活胎檢查
(1)吸收胎
著床腺:新鮮子宮經硫化胺染色後才能見到的子宮內壁上的微小突起。
早期吸收:僅有子宮腺、胎盤母體部及胎盤胎仔部存在。
中期吸收:除上述組織外,還有一些胎仔組織。
晚期吸收:有可辨別的胎芽存在。
F吸收:死亡胚胎,有清楚可辨的指(趾),體重<0.3g。
(2)死胎死亡胚胎,有清楚可辨的指(趾),體重>0.3g。按胎鼠在子宮中的位置給胎鼠編號。
(3)活胎可觀察到胎鼠心跳和(或)運動。按胎鼠在子宮內的位置給胎鼠編號。
2.胎仔外觀檢查用放大鏡對每一個胎鼠進行外觀檢查,首先檢查身體是否勻稱,有無血腫和疝,頭蓋骨有無異常隆起或凹陷,腦脊膜、脊髓或腦有無突起。檢查頭部性狀有無異常,眼、耳、鼻、口的形狀、位置及大小是否正常,上、下頜大小是否正常,有無唇裂。然後用一把鑷子從上下頜間伸入口中,壓下舌,觀察舌、齶有無異常。觀察眼的大小(小眼或大眼),檢查有無突眼、開眼或無眼等。四肢檢查包括大小、形狀、位置及趾(指)的數目、分離情況等。接著檢查肛門、外生殖器和尾,注意有無肛門閉鎖及位置異常。觀察外生殖器的形狀及大小,尾的長度及有無卷曲。
3.胎仔性別鑒定小鼠胎仔性別的區分,主要以生殖器(陰莖或陰戶)與肛門之間的間距長短及肛殖之間有無被毛作為標誌。主要區別如下:①雄鼠的生殖器突起,並較雌鼠大;②雄鼠的生殖器距肛門較遠;③雌鼠肛門和生殖器之間有一無毛小溝;④雄鼠在肛門和生殖器之間長毛。胎鼠性別的確定,也可采用下腹部切口,暴露卵巢或睾丸的方法。
家兔胎仔性別鑒定主要是根據動物肛門與生殖器之間的距離來區分,距離遠的為雄性,距離近的為雌性,主要區別如下:①雄兔的生殖器突起較雌鼠明顯;②雄兔的生殖器距肛門較遠;③雄兔的乳頭不明顯,雌兔有8~12個乳頭,很明顯;④對於剛開眼的仔兔,在檢查性別時,可用食、中指夾住尾巴,用拇指輕輕向上推開生殖器,局部呈“()”形,下為圓柱體者為雄兔,局部呈“Y”形,下端裂縫及於肛門者為雌兔。
4.胎仔的頭部檢查胎仔的頭至少在Bouin液中固定48h後再進行檢查。檢查時頭部置於蠟板上,用立體顯微鏡驗證在外觀檢查時發現的畸形。記錄所見外觀異常,用解剖刀或單麵刀片將刀切5刀,分成6個端麵,檢查頭的內部結構,記錄所見畸形。遇到血腫、腫塊、凹陷等應在其上再切一刀,以便查明引起這些異常的原因。
第1刀,暴露舌、齶、上唇和下頜,這一刀從腹側至背側(即水平切麵),由嘴開始,經兩耳切開。切除舌後,檢查齶和上唇是否完全閉合(齶裂和唇裂)。然後將頭翻轉,前背後向上,準備切另外4刀(額切麵)。
第2刀,由雙眼前方輕輕下切。暴露鼻中隔、鼻竇和齶的橫切麵,記錄鼻竇的形狀及異常閉合。
第3刀,由雙眼切下,暴露大腦的嗅葉、鼻中隔後部大部、鼻竇(鼻咽腔)和齶。胎仔的眼由視杯、視網膜、玻璃體、晶狀體和角膜組成。除去玻璃體腔,檢查卷曲的視網膜。檢查上述排列是否正常。
第4刀,由雙眼後麵切下,暴露大腦半球和側腦室(第Ⅰ和第Ⅱ腦室),注意觀察這些腦室有無異常的縮小或擴張(腦積水)。
第5刀,暴露位於間腦的第Ⅲ腦室,第Ⅲ腦室的 側和背側通過室間孔與大腦半球內側腦室相連,尾側通過大腦導水管與第Ⅳ腦室相連。注意檢查第Ⅲ腦室有無縮小或擴張。
胎仔頭部畸形,除齶裂和開眼外,其他各種畸形的頭部切片均分別儲存在含有Bouin液的小瓶中,注明研究編號、處死日期、母體號、胎仔號、畸形種類等。
5.胎仔的內髒檢查取每窩1/2或1/3活胎,放入Bouin液固定2周,2周後取出胎仔,自來水衝去Bouin液,用單麵刀片進行切片檢查。檢查時將胎仔放在臘板或木板上,剪去四肢和尾,左手固定胎鼠,右手持刀片從頭部逐一向下做橫切片,共切11~12片。
非固定胎仔內髒檢查首先從胸腔開始觀察,胸腔檢查胸腺、肺、心包和心髒、氣管。腹腔內髒檢查計數肝葉,檢查斑點及融合、質地和顏色是否正常,檢查膽囊、膽管、胃、脾、胰和幽門括約肌,注意觀察大腸和小腸有無變異。
第二節 動物的去勢及剖腹產技術
一、動物的去勢方法
實驗動物的去勢是指通過人為的方法摘除或破壞實驗動物的生殖腺及其附屬器官而使之絕育的方法。
(一)睾丸切除術
睾丸切除術是指切除雄性動物的睾丸,常用於雄性動物的去勢。
1.大鼠睾丸切除術大鼠的睾丸在未成熟時位於膀胱附近,成熟後降入陰囊內。睾丸呈橢圓形,淡紅色。手術前,全身麻醉動物,仰臥固定,術部常規消毒。術者用左手手指輕輕按壓腹部,使睾丸進入陰囊內,再用手固定住。然後切開陰囊皮膚將睾丸切除。
2.犬的睾丸切除術犬的陰囊位於腹股溝部與肛門之間的中央部。睾丸比較小,呈卵圓形,長軸自上後方向前下方傾斜。附睾比較大,緊密地附著於睾丸外側麵的背側方。
(1)術前檢查對有外生殖器皮膚病,較大的疝、鞘膜積液、精索靜脈曲張等病症者不宜手術。
(2)手術方法全身麻醉動物,仰臥固定。陰囊部剃毛、消毒。術者左手將睾丸擠入陰囊中際線平行的兩側,並用手指固定睾丸,防止回縮到腹溝部。左手持刀,在睾丸最突出的陰囊壁上做與中際線平行的2個切口。切口不宜過大,能擠出睾丸為好。擠出2個睾丸後撕斷白筋膜,在精索最細處一次割斷2條精索。陰囊切口可不必縫合,塗以碘伏,讓其自動愈合。此外,在睾丸脫出後,也可以撚轉法切除兩側睾丸,或以結紮法切除兩側睾丸。
3.兔的睾丸切除術兔的陰囊不明顯,為貼在腹壁的2個皺褶。鞘膜管較大,與陰囊內的鞘膜腔間無明顯界限,因此睾丸可自由地進入鞘膜管和腹腔內。兔的睾丸呈長卵圓形,長度平均為2.5~3cm,寬1.2cm。
手術前,全身麻醉動物,仰臥固定。術前常規消毒。術者以左手中指由前向後逐漸按壓兔的腹壁,將2個睾丸擠到陰囊中。右手持刀,切開陰囊皮膚,連同總鞘膜一起擠出睾丸,在精索的地方用絲線結紮,然後在結紮的外方切除睾丸。手術時一定要用絲線結紮總鞘膜,以防腸管通過鞘膜管從陰囊切口內脫出。
4.貓的睾丸切除術貓的陰囊較緊地貼在後臀兩股之間,肛門的腹麵,正中縫明顯。2個睾丸較小,術前可用手指按壓小腹,使睾丸進入陰囊。切除方法同犬的睾丸切除法。
(二)卵巢切除術
卵巢切除術是指切除雌性動物的卵巢,方法簡單易行,常用於雌性動物的去勢。
1.犬的卵巢切除術犬的卵巢完全由卵巢囊覆蓋,性成熟之前表麵光滑,性成熟後卵巢變得粗糙和不規則。
(1)術前準備術前檢查有無處於發情狀態。如果發情,最好不要施行手術,以免在切除卵巢時發生大出血。術前禁食半天,以免腸道內容物充滿時不易摸取卵巢。全身麻醉動物,仰臥固定。
(2)手術方法在腹壁臍後方至恥骨前部剪毛、清洗、消毒。於腹中線一側臍部後方向恥骨部切開皮膚,切口長度應根據動物個體大小而定(6~12cm)。分離皮下組織,切開腹白線處腱膜和腹膜,打開腹腔。用食指或卵巢鉤伸入一側腹腔背部搜尋子宮角。左右卵巢和子宮角分別位於左右腎髒後方的腰溝內,屈曲指節將其夾在指與腹壁之間鉤出。也可在膀胱背側找到子宮體,沿著子宮體向前尋找一側子宮角,此法簡單,容易操作。卵巢子宮暴露後用食指和拇指鈍性扯斷卵巢懸韌帶,將卵巢引近創口,注意不要撕破卵巢動靜脈。先在卵巢係膜無血管區上開小孔,用三把止血鉗順序鉗夾卵巢係膜和血管。然後在靠近卵巢的第一、第二把止血鉗間剪斷卵巢係膜。繞過第三把止血鉗打一單結,除去此鉗,將結收緊,再打第二個單結。然後在第二把止血鉗下方做一貫穿結紮。用鑷子夾住卵巢係膜斷端邊緣,除去第二把止血鉗。如果斷端無出血,即可將其還納正常位置。用同樣的方法摘除另一側卵巢。
2.大、小鼠的卵巢切除術小鼠和大鼠的卵巢都在腎髒下方,呈小球狀,表麵凹凸不平。
(1)術前準備全身麻醉動物,腹部切口仰臥固定,背部切口俯臥固定。
(2)手術方法小鼠多采用背部切口,大鼠多采用腹部切口。
1)背部切口剃除背部被毛,消毒皮膚。於卵巢部的肌膜做一小切口,用眼科鑷子取出卵巢,以絲線結紮。縫合肌肉和皮膚並塗碘酒消毒。
2)腹部切口剃除腹部的毛發,消毒。沿正中線切開腹部皮膚,分離腹肌,尋找卵巢,用眼科鑷子取出卵巢,以絲線結紮。縫合傷口並消毒。
(三)卵巢子宮切除術
卵巢子宮切除術是指將雌性動物的卵巢和子宮一起切除,用於雌性大動物的去勢。
犬的卵巢子宮切除:犬的子宮角長而直,呈“V”字形。子宮角壁較腸壁厚。子宮闊韌帶與腸係膜很相似,但血管較少。
1.術前準備術前檢查有無處於發情狀態。如果發情,最好不要施行手術,以免在切除卵巢時發生大出血。術前禁食半天,以免腸道內容物充滿時不易摸取卵巢。全身麻醉動物,仰臥固定。
2.手術方法卵巢摘取法見卵巢切除法。
兩側卵巢摘除之後,展開兩側子宮闊韌帶,沿子宮角旁向後撕裂子宮闊韌帶至子宮體部。大犬需要做子宮闊韌帶集束結紮,以免出血,小犬隻需結紮即可。牽拉兩子宮角,將子宮體和子宮頸引出創口外。在子宮頸前方,用三把止血鉗並排夾住子宮體,從前、中止血鉗間切斷子宮體。然後分別打開中、後止血鉗鉗夾處,貫穿結紮子宮體,並同時結紮子宮體兩側的血管,最後,用鑷子夾住子宮體殘端,確認無出血後將其送入骨盆腔,用常規方法閉合腹壁切口。術後全身應用抗生素3~5天以防止感染。術後7~10天拆除皮膚縫線。
二、動物的剖腹產手術
(一)小鼠的剖腹產手術
1.術前準備
(1)供隔離器內使用的物品聚氧乙烯薄膜隔離器、小鼠盒、燒杯、紗布、毛巾、脫脂棉、鑷子、眼科剪刀、注射器、針頭、墨汁。
(2)剖腹手術用器材手術台、照明燈、手術巾、手術刀、剪刀、鑷子、止血鉗、紗布、5%碘伏、2%過氧乙酸、藥液渡槽、傳遞袋。
(3)消毒隔離器用2%過氧乙酸噴霧,密封2h,通風24h,無菌檢查合格備用。隔離器內用物品置於滅菌罐內121℃30min高壓蒸氣滅菌後傳入。外科手術用器材121℃、30min高壓蒸氣滅菌。手術前將藥液渡槽同隔離器連接起來,裝上適量的2%過氧乙酸溶液。將傳遞袋投入藥液渡槽中,一頭的係帶引入隔離器內。
(4)孕鼠的選擇在健康群中選出種鼠,將雌雄同居,記錄同居日期。當小鼠食欲突然下降、煩躁不安、有做窩行為,胎頭與身體大小相同,且外陰潮紅並處於開口狀態時,該妊娠鼠已臨產,應立即進行剖腹產手術。
(5)調溫手術前預先將室溫、消毒液溫度調至35℃。
2.手術過程頸椎脫臼法處死孕鼠,將其全身浸入5%碘伏液中,待浸濕毛後立即取出。背部固定於手術台上,切開腹部暴露子宮,用止血鉗夾住子宮頸及兩側輸卵管,在止血鉗外側切斷,連同止血鉗取下子宮,放開止血鉗,用紗布裹住子宮,放在傳遞袋中。通過隔離器拉動傳遞袋的係帶,將子宮拖入隔離器內。迅速用大量無菌水清洗子宮,切開子宮,取出胎仔。擦掉口、鼻上的羊膜、羊水、擰斷臍帶,擦幹身體,促其呼吸,體色由紫色轉為鮮紅色後放入鼠盒中保溫。清除隔離器中的廢棄物,用注射器將墨汁注入小鼠皮膚進行編號。