重複性試驗：平行製備供試品溶液6份，分別精密吸取衍生後的供試品溶液10 μL進樣測試，記錄峰麵積A，分別測得RSD為2.8%（Ser），2.7%（Glu），2.5%（Gly），2.7%（Arg），2.2%（Thr），2.5%（Ala），2.7%（Pro），2.3%（Val），2.5%（Lys），2.9%（Ile），2.1%（Leu），2.7%（Phe），結果表明，供試品溶液的重複性符合規定。
加樣回收率試驗：取已知含量的醒腦通絡注射液（批號20100301，Ser，Glu，Gly，Arg，Thr，Ala，Pro，Val，Lys，Ile，Leu，Phe的質量分數分別為0.17，0.07，0.13，0.43，0.20，0.20，0.35，0.29，0.13，0.16，0.33，0.15 g·L-1）進行加樣回收率試驗。具體方法如下：精密吸取本品0.5 mL，置10 mL量瓶中，精密加入12種氨基酸的溶液（精密吸取氨基酸標樣溶液1 mL，置10 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（Ser，Glu，Gly，Arg，Thr，Ala，Pro，Val，Lys，Ile，Leu，Phe的質量分數分別為0.26，0.37，0.19，0.44，0.30，0.22，0.29，0.29，0.37，0.33，0.33，0.41 g·L-1）0.5 mL，加水定容至刻度，搖勻，平行製備6份，按照1.6項衍生方法衍生後進行測定，計算回收率。結果回收率分別為96.3%，95.4%，97.2%，98.5%，101%，101%，98.5%，103%，101%，99.4%，101%，104%，RSD分別為2.8%，2.5%，3.1%，2.1%，1.6%，1.1%，2.4%，3.0%，2.1%，1.9%，1.5%，2.8%，結果表明回收率較好。
樣品測定：分別取10批不同批次的醒腦通絡注射液，依法分別測定，計算12種氨基酸的含量測定數據。
3 討論
醒腦通絡注射液處方中水牛角經酸水解，故測定氨基酸時無需對樣品進行水解處理。氨基酸為末端吸收，因此要衍生化完全才能準確檢測。本法中氨基酸衍生試劑在紫外圖譜中可產生吸收，因此，通過對比觀察剩餘氨基酸衍生試劑的量，可以較為方便的得知氨基酸衍生化的程度。
本方法衍生過程中加熱的目的是將衍生酪氨酸時的副產物轉化為單一的主產物。在室溫下此轉化反應較緩慢，其半衰期約1 h，衍生空白溶液時無需加熱。
醒腦通絡注射液定量指紋圖譜方法學考察結果表明，該方法精密度、重複性、回收率結果均較好，能夠準確、快速的測定醒腦通絡注射液氨基酸指紋圖譜及12中氨基酸的具體含量。且該方法重複性良好，10批醒腦通絡注射液的指紋圖譜相似度均在0.95以上，12種氨基酸的含量均一、穩定。該方法從定性及定量2個層麵反應醒腦通絡注射液中氨基酸的存在情況，提高了醒腦通絡注射液氨基酸質量評價水平。
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