精密度試驗：取批號為100301的醒腦通絡注射液，按上述供試品溶液的製備方法製備供試品溶液，連續進樣6次進行測定。以第1次進樣所得指紋圖譜做為對照計算後5次進樣所得指紋圖譜的相似度，結果相似度均不小於0.98，均符合指紋圖譜的技術要求，表明該方法精密度良好。
穩定性試驗：取批號為100301的醒腦通絡注射液，按上述供試品溶液的製備方法製備供試品溶液，於0，1，3，6，9，12 h分別測定1次指紋圖譜，共測6次，以0 h進樣所得指紋圖譜為對照計算相似度，相似度結果均不小於0.98，表明供試品溶液12 h內成分是穩定的，符合指紋圖譜的技術要求（應不小於0.95）。
重複性試驗：取批號為100301的醒腦通絡注射液，按上述供試品溶液的製備方法製備供試品溶液，同法製備供試品溶液6份，依法測定，結果計算相似度，相似度結果均不小於0.99，符合指紋圖譜的技術要求（不小於0.95）。
根據以上方法學考察結果，表明該方法測定醒腦通絡注射液的氨基酸指紋圖譜精密度、重複性、穩定性均較好，能夠準確測定該製劑的氨基酸指紋圖譜。
指紋圖譜相關性研究：分別取醒腦通絡注射液、水牛角提取物、三七提取物、黃芩提取物、麝香蒸餾液、丙二醇適量，按供試品的製備方法製備，分別測定。取水牛角藥材適量，以2.5 mol·L-1的硫酸溶液水解完全，以氫氧化鈉溶液中和後，按供試品的製備方法製備，測定。藥材及各中間體相關性。
A.水牛角提取物；B.醒腦通絡注射液；C.水牛角藥材；D.三七提取物；E.黃芩提取物；F.麝香蒸餾液；G.丙二醇。
由相關性圖譜可見，指紋圖譜中的9號峰主要來源於黃芩提取物及丙二醇。12種氨基酸主要來源於水牛角，三七提取物也存在一定的量。
指紋圖譜的建立：分別取10批不同批號的醒腦通絡注射液，按供試品的製備方法製備，分別測定。將 10批醒腦通絡注射液指紋圖譜導入中藥色譜指紋圖譜相似度評價係統的操作規範軟件（版本2004A）， 對保留時間 13～38 min（溶劑峰剪切：0～13 min，38～45 min）的色譜峰進行多點校正後，自動匹配，生成對照指紋圖譜，共標定13 個共有峰， 其中蘇氨酸為參照峰（S），各批醒腦通絡注射液樣品與對照指紋圖譜比較相似度在 0.982～0.993。
2.2 含量測定方法驗證與檢驗
2.2.1 陰性供試品製備 取黃芩提取物、麝香蒸餾液、丙二醇按照製備工藝製備，製備陰性供試品溶液，測定，陰性結果。
2.2.2 含量測定方法學考察 標準曲線及線性範圍：精密取12種氨基酸標樣（2.5 mol·mL-1）0.2，0.4，0.6，0.8，2.0，3.0 mL加高純水至10 mL稀釋，分別取10 μL按照1.6項衍生條件衍生，注入液相色譜儀，測定。分別記錄峰麵積A。以峰麵積對相
1.絲氨酸；2.穀氨酸；3.甘氨酸；4.精氨酸；5.蘇氨酸；6.丙氨酸；7.脯氨酸；8.纈氨酸；9.賴氨酸；10.異亮氨酸；11.亮氨酸；12.苯丙氨酸。
12種混合氨基酸標準液（A）、醒腦通絡注射液（B）、陰性供試品（C）的HPLC
Fig.4 HPLC Chromatograms of 12 amino acids（A）， Xingnao Tongluo injection（B） and blank reference（C）
應摩爾濃度進行回歸，各組分的線性回歸方程及相關係數。
精密度試驗：以2.2.1項中線性的第3個點對照品溶液為考察點，精密吸取衍生後的對照品溶液10 μL進樣測試，記錄峰麵積A，連續進樣6次，測得6次的RSD分別為1.38%（絲氨酸，Ser），1.1%（穀氨酸，Glu），1.1%（甘氨酸，Gly），0.91%（精氨酸，Arg），0.69%（蘇氨酸，Thr），0.83%（丙氨酸，Ala），0.78%（脯氨酸，Pro），0.89%（纈氨酸，Val），0.79%（賴氨酸，Lys）0.98%（異亮氨酸，Ile），0.91%（亮氨酸，Leu），0.85%（苯丙氨酸，Phe），結果表明，儀器精密度良好。
穩定性試驗：分別在0，2，4，6，8，10，12 h，精密吸取衍生後的供試品溶液10 μL進樣測試，記錄峰麵積A，分別測得RSD為2.2%（Ser），2.3%（Glu），2.5%（Gly），2.3%（Arg），2.8%（Thr），2.8%（Ala），2.0%（Pro），1.3%（Val），2.6%（Lys），2.0%（Ile），2.2%（Leu），2.6%（Phe），結果表明，供試品溶液在12 h內穩定性良好。