1）目的要求；
通過雙抗體夾心法，初步掌握ELISA檢測植物病毒的操作方法。
2）基本內容；
本實訓采用雙抗體夾心法，包括緩衝液配製、樣品製備、包被抗體、封閉、加樣、孵育檢測抗體和二抗、檢測等操作過程。
3）材料與用具；
所需試劑配液及樣品材料如下：光照培養箱、研缽、微量移液器、恒溫培養箱、酶標板、酶標儀、各種所需配液及樣品材料。
①碳酸鹽包被緩衝液：3.03g NA2CO3，6g NAHCO3，溶解於900ml雙蒸水中，檢測並調整pH至9.6，定容至1L。
②PBS：1.16g NA2HPO4，0.1g KCl，0.1g K3PO4，4g NACl，溶於500ml蒸餾水中，調整pH至7.4。
③封閉液：溶於PBS的1%BSA，血清，脫脂牛奶，酪蛋白或明膠等。
④洗滌液：PBS或是TBST（TrisHCl，pH7.4+0.05%吐溫20）。
⑤抗體或抗原稀釋液：1×封閉液。
⑥樣品製備。取待檢馬鈴薯嫩葉0.5～1g，加入5ml抽提緩衝液，研磨，4000r/min離心5min，取上清液備用。
4）實驗步驟；
（1）包被抗體。將50μl用碳酸鹽包被緩衝液（pH7.4）稀釋的抗體加入酶標板中，一般抗體濃度為1～10μg/ml。蓋上模板包被4℃保濕過夜後，倒掉，用洗滌緩衝液衝洗板3次，每次3～5min，輕拍孔板使洗滌液甩幹。
（2）封閉。每孔中加入200μl封閉液（1%BSA或5%脫脂牛奶），室溫封閉1～2h或4℃過夜。
（3）加樣。每孔加100μl稀釋好的樣品，37℃保濕孵育90min，甩去孔板裏的溶液，洗滌液洗滌3次。
（4）孵育檢測抗體和二抗。每孔中加入100μl稀釋好的檢測抗體，室溫孵育2h；用洗滌液洗滌3～5次；每孔中加入100μl稀釋好的標記二抗，繼續室溫孵育1～2h；孵育後洗滌3～5次。
（5）檢測。每孔中加入100μl的底物溶液，待顯色充分後加入100μl的終止液並在酶標儀上測定405nm的光吸收值（OD405）。當檢測樣品OD值陰性對照OD值≥2時，可判定此樣品帶有病毒。
5）思考與分析；
ELISA檢測過程中抗原量與顏色變化有什麼關係？