正文 第52章 實訓7.2汁液塗抹法病毒鑒定(1 / 1)

1)目的要求;

通過具體操作,使學生掌握草本指示植物汁液塗抹法鑒定脫毒苗的方法。

2)基本內容;

指示植物法是利用病毒在感病的指示植物上出現的枯斑和某些病理症狀,作為鑒別病毒的依據。本實訓以荷蘭豆苗為指示植物,通過汁液塗抹法鑒定馬鈴薯試管苗中是否含有病毒。

3)材料與用具;

0.1mol/L磷酸緩衝液(pH7.0)、金剛砂、研缽、燒杯、紗布或專用過濾袋、待鑒定植株(馬鈴薯試管苗)、指示植物(荷蘭豆苗)。

4)操作步驟;

(1)將所需要的用具、試劑等移至具防蟲網溫室中。

(2)接種時從待鑒定植物上取1~3g幼葉,在研缽中加10ml水及等量0.1mol/L磷酸緩衝液(pH7.0)研磨至勻漿,用雙層紗布過濾,收集濾液,或使用專用的具過濾功能的塑料袋研磨過濾。

(3)濾液中加入少量500~600目金剛砂,作為指示植物葉片的摩擦劑。

(4)在準備接種的指示植物葉片上,用筆尖打一小孔作為標記,然後用棉球蘸取少許加入金剛砂的濾液,在葉麵上輕輕塗抹2~3次進行接種,使葉片表麵造成小的傷口,而不破壞表層細胞。靜置5min後用清水衝洗葉麵。接種時也可用手指、紗布墊、海綿蘸汁液塗抹等均可。也可以將少量的金剛砂灑在指示植物的葉片上,用棉球或手指蘸取少許待鑒定植物汁液,在葉麵上輕輕塗抹2~3次進行接種,靜置5min後用清水衝洗葉麵。

(5)接種後將鑒定植株移入網室。應注意保溫、防蟲,一般溫度保持在15~25℃。

(6)觀察結果。2~6d後即可見症狀出現。

如無症狀出現,則初步判斷為無病毒植株,但必須進行多次反複鑒定,這是由於經過脫毒處理後,有的植株體內病毒濃度雖大大降低,但並未完全排除,因此必須在無蟲溫室內進行一定時間的栽種後,再重複進行病毒鑒定。經重複鑒定確未發現病毒,這樣的植株才能進一步擴大繁殖,供生產上使用。

5)思考與分析;

(1)為什麼要對脫毒處理的試管苗進行病毒鑒定?為什麼需要進行重複鑒定?

(2)若指示植物出現病斑,分析屬於哪種類型?