正文 第九章 骨及軟骨分子生物學基本實驗技術(八)(2 / 3)

(1)神經肽對骨細胞的直接作用:這些神經肽可直接調節骨細胞,與成骨細胞、破骨細胞膜上的神經肽受體結合。Kawase等證實CGRP能與成骨細胞膜和破骨細胞上的受體結合,可以刺激成骨細胞促進成骨,抑製骨吸收,刺激幹細胞有絲分裂和骨充質細胞分化刺激骨形成。Goto等發現SP能與破骨細胞膜上的神經肽受體(NK1-R)結合,促進破骨細胞增殖,參與骨吸收。Shih等用SP培養骨髓幹細胞,能促使骨細胞增殖,而VIP則為cAMP依賴機製刺激骨吸收。

(2)神經肽影響骨折的局部血供:骨組織和血管周圍有大量的CGRP和NPT、SP免疫陽性神經纖維,且CGRP、SP、VIP是較強的內源性擴血管肽,這些神經遞質可調節血管功能,增加骨折局部血供,同時CGRP、SP也有促進血管內皮細胞增生,刺激血管生成作用,為骨折修複改建創造有利條件。

(3)神經肽與細胞因子:在神經肽的研究中,Vignery等發現CGRP可使鼠股骨原始成骨細胞產生IGF-1。SP可調節骨髓基質生成幹細胞因子及IL-1,而Hukkanen等發現CGRP對炎症細胞具有抑製作用,當神經損傷時,CGRP減少,則骨折愈合局部炎症反應加強,產生許多細胞因子如TNF、IL-1和G-CSF等,這些因子在骨折早期可促進成骨,骨痂量增多。

4.激素

(1)生長激素(GH):生長激素(GH)是由腺垂體嗜酸性細胞產生的,以脈衝式的方式分泌,有明顯的種屬的特異性。它是膠原生長的一種主要調節劑,在骨生長和骨折愈合中的作用有以下三方麵:①正常情況下,在肝內GH可刺激胰島素樣生長因子IGFs的生成,IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ作用媒介物對成骨細胞都有很強的刺激作用。成骨細胞膜上有親和力的Ⅰ型和Ⅱ型IGF受體,IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ可以明顯促進成骨細胞的有絲分裂,影響成骨細胞的分化,興奮堿性磷酸酶活性,促進骨鈣素合成並增強骨連接素的基因表達。骨折後血清中GH濃度增高,同時垂體生長激素細胞(即嗜酸細胞)也處於高機能狀態,以促進骨折愈合。②GH對軟骨有直接作用,促進生長板細胞分化和生長,而骨的生長取決於生長板軟骨內骨化,GH能引起新骨生長。③GH可以改善腸鈣吸收,興奮腎髒1-羥化酶活性,使25(OH)D3轉化為1,25(OH)2D3,而使1,25(OH)2D3濃度增高,活性加強,有利於骨基質中鈣鹽沉積。柳海峰等對骨折動物模鼠給服中藥三花接骨散和阿拉伯膠做對照,分別於服藥3、7、14及28天取出垂體觀察其重量。用圖像分析儀觀察經免疫組化染色的垂體生長激素細胞麵積和灰度。結果表明鼠體重及垂體量實驗組與對照組無明顯差異,但生長激素細胞麵積和灰度與對照組比較有明顯差異,服用三花接骨散組生長激素麵積和生長激素含量均明顯增高。說明中藥三花接骨散能增加垂體生長激素細胞分泌生長激素以促進骨折愈合。隋豔華製作脛骨(大鼠)骨折模型,以康骨膠囊灌胃,於骨折後7、14、21、28天分別用GH放免試劑盒測定血清GH的濃度,結果表明骨折後服藥組的大鼠血清GH濃度增高明顯,從而說明康骨膠囊有促進骨愈合的作用。

(2)雌激素:目前,已證明成骨細胞表麵有雌激素受體。雌激素不僅通過成骨細胞上的受體促進其增殖分裂,在骨折愈合中發揮作用,而且通過目前研究,雌激素對成骨細胞的作用可能包括間接作用和旁分泌作用而影響成骨細胞。黃遂柱等,研究不同劑量的雌激素對卵巢摘除後發生骨質疏鬆小鼠股骨骨折愈合的影響。結果顯示,雌激素缺乏和補充超生理劑量雌激素均對去勢小鼠骨折早期愈合不利,補充生理劑量雌激素對小鼠骨折愈合影響較小。雌激素對全身所有骨骼均有反應,其作用機製可能與其他皮質激素一樣,即通過骨細胞核內特異受體作用於DNA,控製mRNA的合成。

5.結論關於骨折的治療和探討骨折愈合的方法,近幾十年來有了驚人的發展。20世紀40年代西方骨科權威WatsonJohns在其著作中曾斷言:治療骨折除正確的複位、固定與功能鍛煉三大原則,別無其他行之有效的促進骨折愈合的方法,隻能任其自然愈合。然而隨著近代科學技術的突飛猛進,治療骨折雖然還不能逾越複位、固定與功能鍛煉三大原則,但行之有效的促進骨折愈合的方法已多種多樣。應用現代生物化學、形態學、內分泌學、生物力學、臨床醫學等方法,對骨折愈合的生化代謝、病理生理變化、愈合機製、藥物影響等進行了深入研究,已使骨折愈合成為一個完整的骨科分支領域。近年來應用細胞生物學、分子生物學方法探討骨折愈合機製,為促進骨折愈合療效機製研究提供更為科學的理論依據。

中醫藥治療骨折曆史悠久、經驗豐富、療效顯著。根據中醫理論體係、骨折愈合的基本理論,采用三期辨證論治用藥,對調節機體損傷所造成的髒腑、經絡、氣血功能紊亂,調節機體抗病與修複創傷的內在因素,促進骨折愈合及損傷修複均有良好作用。但是,中藥促進骨折愈合的療效機製是一項極為複雜的過程,應用現代科學技術手段和方法闡明其機製是探討中藥促進骨折愈合的理想方法,特別是應用細胞生物學和分子生物學的方法,已成為一種發展趨勢。

(三)中醫藥治療骨性關節炎分子生物學研究進展

骨性關節炎是一種多發於老年人的慢性進行性骨關節疾病。目前比較通用的定義是滑膜關節以伴有關節周圍骨質增生為特點的軟骨喪失所致的疾病(曾慶餘,骨關節炎,天津科學技術出版社,1999)。從流行病學看,骨性關節炎的發病與年齡、肥胖、遺傳、激素、運動、創傷、職業等多個因素密切相關。其基本病理變化可分為兩種:①關節的原發增生性改變,主要在軟骨周圍及滑膜。②關節軟骨的退行性變。關節滑膜及關節周圍支持結構在關節發病過程中亦受累及。

骨性關節炎屬於中醫“痹證”範疇。祖國醫學認為骨性關節炎是痹證中特殊類型。《素問·痹論篇·第四十三》雲:“風寒濕三氣雜至,合而為痹也。”《靈樞》雲:“經脈者,所以行血氣而營陰陽,濡筋骨,利關節者也。血和則經脈流行,營複陰陽,筋骨強勁,關節清利矣。”總之,前人經長期探索,認為骨性關節炎與“虛”、“邪”、“瘀”密切相關。肝腎虧虛是病變的根本,風寒濕邪是致痹的外因,瘀血是其病變過程中的病理產物。邪、瘀日久可致虛,虛則邪、瘀難卻,而邪、瘀兩者也相互為患。中醫藥治療骨性骨節炎已獲得肯定的療效。近年來,隨著分子生物學技術的不斷發展,國內外學者對骨性關節炎發病及其防治的分子機製進行了大量的研究,取得了很大的進展。其防治機製如下: