2.隨機引物法采用隨機組合的六核苷酸片段混合物作為DNA合成的引物。這些混合的寡核苷酸總可以在DNA模板上找到能夠互補配對的區段，基本上適用於所有的DNA模板。於100℃使DNA模板變性後，將模板與引物混合，由於引物很短，很容易與模板DNA結合，在Klenow酶的存在下，合成新的DNA鏈，在此過程中，將帶有標記物的dNTP摻入的新合成的DNA鏈中。標記的DNA探針經Sephadex G-75柱除去遊離核苷酸後，就可用於分子雜交實驗。使用放射性核素探針時可通過對X線片曝光確定雜交反應的結果。使用非放射性核素探針時，則可通過酶連免疫反應或免疫熒光法確定雜交反應的結果。加入的隨機引物越多，探針合成的起點越多，得到的探針會越短。
（二）主要儀器、材料和試劑
1.主要儀器和材料
放射性核素廢物箱、冰箱（4℃）、真空泵、真空幹燥器、液體閃爍計數器、有機玻璃（如Lucite）防護屏、已矽化的1ml Tip頭、普通Tip頭、Eppendorf管、Eppendorf管架、微量加樣器（0～20μl和0～200μl）、保溫瓶、Parafilm膜、記號筆、鑷子、剪刀、塑料手套。
ApoAⅠDNA探針（DNA片段）。
2.試劑
DNA聚合酶Ⅰ稀釋液：100mmol／L磷酸鈉（pH7.2），10mmol/L DTT，50％甘油。
DNaseⅠ稀釋液：50％甘油，150mmol／L NaCl，10mmol／L Tris-Cl（pH7.5），1mg/ml牛血清蛋白（BSA）。
DNaseⅠ、DNA聚合酶Ⅰ、［α-32P］dATP（New England Nuclcar）、dGTP，dCTP，dTTP。
10×切口平移反應緩衝液：0.5mol／L Tris-Cl（pH7.5），0.1mol/L MgSO4，1mmol/L DTT，500μg／ml BSA。
（三）操作步驟
切口平移法
1.標記反應混合下列反應液（於矽化的Eppendorf管中）：0.5μl探針DNA（ApoA Ⅰ基因）、5μl［α-32P］dATP（10μmol／μl）、5μl dGTP（100μmol／L）、5μl dCTP（100μmol／L）、5μl dTTP（100μmol／L）、4μl DN aseⅠ（100μg／ml）、20μl ddH2O加入5單位的DNA聚合酶Ⅰ，搖勻，14℃保溫2～4小時後加入2μl 0.5mol/L EDTA，終止反應。
2.層析分離已標記的DNA與遊離的［α-32P］dATP
（1）在一支已矽化的Tip頭（1ml）底部（尖端）塞上已矽化的玻璃纖維或棉花。
（2）用浸泡於TE緩衝液的Sephadex G-75裝柱，裝柱時應小心操作，避免產生氣泡。用TE緩衝液平衡該柱，注意應壓緊凝膠。
（3）將切口平移反應液（50μl），加入溴酚藍溶液（1μl），混勻。快速地將樣品加到凝膠柱床上。用TE緩衝液洗脫後立即開始組分收集，每管收集7～8滴，約250μl，共收集15管，采用手提式小型監測器測定每管的放射活性。
（4）合並前導峰的放射活性組分，將Eppendorf管放入液閃瓶內，不加閃爍液，置液閃計數器中計數（測定cpm值）。將標記探針置-20℃冰箱內貯存。
（5）以各管號為橫坐標，每管的cpm值為縱坐標，作圖畫出曲線。
隨機引物標記法
（1）將16μl含1μg模板DNA（線性化或超螺旋的）的雙蒸水加入到1個1.5ml Eppendorf管內。再將DNA置沸水浴中10分鍾，然後迅速置冰上冷卻。
（2）加入4μl標記試劑（地高辛）。每一標記試劑中含：0.35mmol／L X-dUTP（X=DiG），5×隨機引物混合物，dATP、dCTP和dGTP（均為1mmol／L），0.65mmol／L dTTP，5×反應緩衝液，50％甘油，1U／μl Klenow聚合酶（標記純）。將試劑混勻後短暫離心，使反應混合物聚集在管底即可。
（3）在37℃溫育1小時以上（溫育的時間越長，標記DNA的產量越高）。
（4）將2μl 0.2mol／L EDTA（pH8.0）加入到反應管中，或在65℃加熱10分鍾，使反應終止。
（5）按下列步驟沉澱標記的探針：①在2.5μl 4mol／L LiCl和75μl在-20℃預冷的無水乙醇中加入DNA標記物。混勻後置-20℃2小時，使DNA沉澱。②於4℃離心（14000r／min）15分鍾，棄上清。③用預冷的70％乙醇50μl漂洗沉澱物。④於4℃離心（14000r／min）5分鍾，棄上清。⑤將沉澱物抽真空進行幹燥。將沉澱物幹燥十分重要，因為如果雜交混合液中混有葡聚糖硫酸脂時，痕量的乙醇會引起沉澱，也會使背景太深。
（6）用小量的TE緩衝液（pH8.0）溶解DNA沉澱。將探針溶液貯存在-20℃冰箱中。