（7）2%甲基綠對比染色。
（8）水洗，甘油-明膠封固或脫水，透明，DPX封固。
結果：酶活性處呈藍色或紫色。1周後褪色（-20℃冰箱可保存較久），再入硫酸銅可部分恢複。
對照：孵育液中去底物結果陰性；切片先以純酒精37℃浸泡30分鍾結果為陰性。
2.骨骼肌醛縮酶醛縮酶（Aldolase）是一種屬於糖酵解係統的酶。此酶廣泛存在於高等動物。在人體內，該酶大量存在於骨骼肌與組織。其作用是將果糖1，6-二磷酸分解為磷酸二羥丙酮和3-磷酸甘油醛，並催化它的逆反應。骨骼肌醛縮酶顯示用Neupreux和Wegmann法，阿部、清水法或凝膠薄膜法。
Neupreux和Wegmann法
反應原理：果糖1，6-二磷酸在醛縮酶作用下生成3-磷酸甘油醛，後者在NAD存在的條件下，由3-磷酸甘油醛脫氫酶作用而產生NADH，通過黃遞酶或吩嗪甲基硫酸酯（phenagine methosul phate，PMS）使四氮唑還原而顯色。
染色步驟：
（1）新鮮組織冷凍切片貼於載玻片上，室溫幹燥。
（2）將切片浸入孵育液中，恒溫37℃孵育15分鍾。
孵育液配製：0.05mol果糖1，6-二磷酸（鉀鹽）0.4ml，6% EDTA 0.3ml，0.2mol磷酸鹽緩衝液（pH7.2）0.7ml，D-3-磷酸甘油醛脫氫酶（1：30稀釋）0.1ml，NAD（0.3mg/ml）0.2ml，NBT（0.5mg/ml）0.3ml。
（3）切片水洗後以Apathy樹膠封固，或經脫水後以樹膠封固。
阿部、清水法
染色步驟：
（1）新鮮冷凍切片厚10～20μm，貼於載玻上，室溫幹燥。
（2）置80%酒精中，0～4℃溫度下固定20分鍾，室溫幹燥30分鍾。
（3）入孵育液中浸泡，恒溫37℃，10～30分鍾。
孵育液的配製：0.2mol果糖1，6-二磷酸（鈉鹽）2ml，NAD 1ml，NBT 2mg，0.05mol砷酸鹽緩衝液（pH7.6）2ml。
（4）10%中性甲醛溶液固定，脫水，樹膠封固。
凝膠薄膜法——Siegel pette法
染色步驟：
（1）孵育液的配製：果糖1，6-二磷酸10ml，瓊脂糖2g，清蛋白5mg/ml，鹽酸三乙醇胺50ml，EDTA 5ml，KCN 1ml，Na2HASO4 3ml，NAD 1.5ml，PMS 0.2ml，NBT 1.4ml，磷酸丙糖異構酶50μl/ml，3-磷酸甘油醛脫氫酶20μl/ml。
（2）凝膠薄膜製備：蒸餾水中加入瓊脂糖，使成4%濃度，先在溫水浴中溶解，然後移到42℃水浴。取適量該溶液與等量的底物相混合。在一預熱至42℃的放平的金屬板上置一載玻片，將混合的反應液滴於載玻片上，取直徑0.2mm的短鐵絲擺放在液滴的兩側，再用矽酮處理過的蓋玻片覆蓋在滴液上，並在其上置一約5g重的碼加壓。金屬板冷卻後即可形成凝膠薄膜。此膜在水蒸氣飽和的環境中，於冷處可存放數小時。
（3）將凝膠薄膜表麵的蓋玻片取掉，並將覆有凝膠薄膜的載玻片置於30℃的金屬板上加熱2～3分鍾，使薄膜表麵略幹。
（4）新鮮冷凍切片裱放在蓋玻片上，室溫幹燥。將切片蓋在凝膠薄膜上，在充氮氣的溫盒中進行反應。當觀察到適當的反應顏色出現後，取下裱貼切片的蓋玻片，經水洗，4%戊醛固定1小時，甘油膠封固。
結果：骨骼骨呈強陽性。
注：NAD：煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（Nicotinamide daenine dinuleotide）；
NBT：氮藍四唑（Nitroblue tetrazolium）；
PMS：吩嗪甲基硫酸鹽（Phenazine methosulfate）。