（3）用生理鹽水衝洗
（4）於1%甲醛溶液鹽水中固定10分鍾。
（5）15%酒精中浸洗5分鍾。
（6）甘油-明膠封固。
對照：孵育液去除底物以0.05ml/L（0.74%）丙二酸鈉替代。
染色結果：酶活性部位顯藍色二甲脂沉澱，活性較低時形成紫紅色單甲沉澱。
說明：SDH對固定液很敏感，大鼠各髒器的SDH隻能耐受冷甲醛溶液固定5～15分鍾，所以，采用後固定法。
2.乳酸脫氫酶乳酸脫氫酶是必需輔酶的脫氫酶，為糖原無氧酵解的酶係，故為無氧酵解途徑標誌酶，在多種細胞代謝中起關鍵作用。肝和骨骼肌細胞的LDH活性，高於心肌正常紅細胞的LDH活性，比血清的高1000倍。
反應原理：與SDH的基本相同，隻是需加用NAD輔酶Ⅰ（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸），四唑鹽接受還原型輔酶Ⅰ的氫而被還原為深藍色不溶的甲脂沉澱。
染色步驟：
（1）新鮮或醛固定冷凍切片。
（2）滴片法滴加孵育液於切片上，置濕盒內，37℃，30分鍾。
孵育液的配製：甲液：0.2mol/L PB（pH8.0）25ml，乳酸鈉0.2g，NAD 0.125g；乙液：硝基四唑（Nitro-BT）2mg，0.2mol/L PB（pH8.0）2ml。將甲液2ml、乙液2ml、PVP 300mg混合配製。
（3）蒸餾水洗淨。
（4）甘油-明膠封固。
染色結果：酶活性部位呈現藍色二甲脂沉澱。
說明：輔酶Ⅰ（NAD）和輔酶Ⅱ（NADP）在室溫下易吸水潮解失活，稱量時要快而準，最好將近期要用的酶一次稱出分裝成多個小瓶保存在0℃以下的幹燥器中備用。
（四）裂解酶
1.氨基肽酶氨基肽酶是蛋白質分解酶之一，能切斷蛋白質或多肽與氨基末端相連接的肽鍵，廣泛存在於組織內，定位於溶酶體。在許多病理情況下，酶活性顯著。
亮氨酸氨基肽酶（leucine aminopeptidase）顯示氨基肽酶
反應原理：Nachlas等（1957）及McCabe Chayen（1965）法（Nachlas method（McCabe chayen 1965）for leucine aminopeptidase）：底物亮氨酰-β-萘酰胺被酶催化水解，所遊離出萘酚立即與重氮鹽偶聯，生成有色的偶氮染料，再經硫酸銅處理，使偶氮染料變為穩定的藍色銅螯合物沉澱於酶活性部位，借其色顯示酶活性及定位。
染色步驟：
（1）組織處理：冷丙酮、甲醛溶液-鈣（4℃）固定或不固定。未固定組織恒冷箱切片後固定（丙酮較甲醛好）或不固定直接入孵育液。
（2）切片入孵育液，37℃，15分鍾至2小時，先作用15分鍾，更換新孵育液作用至反應適當為止（腎組織約15分鍾，肝組織約2小時）。
孵育液的配製：
A.底物液：亮氨酰-β-萘酰胺（L-leucyl-4-methoxy B-naphthylamide ）4mg，乙醇0.1ml，雙蒸水4.9ml。
B.生理鹽水（0.85%NaCl）4.0ml。
C.0.1mol/L硫酸銅：硫酸銅（cupric sulphate）798mg，雙蒸水50ml。
D.氰化鉀液：氰化鉀（pot.cyanide）65mg，雙蒸水50ml。
E.0.1mol/L醋酸緩衝液（pH6.5）5.0ml。
孵育液（臨用時配製，按順序混合）將A液0.5ml、E液5.0ml、B液4.0ml、D液0.5ml、固藍B 5mg混合配製。
（3）過洗生理鹽水。
（4）0.1mol/L硫酸銅2分鍾（螯合作用，使沉澱不溶而定位，顏色也加深）。
（5）生理鹽水洗。
（6）未固定的組織切片可用4%甲醛固定，蒸餾水洗。