(四)武兆發改良Mallory一步三色法
染色步驟:
(1)固定,切片同前,切片下行入水。
(2)再染染液,一次性染色5~15分鍾。
染液的配製:酸性複紅1.5g,苯胺藍0.5g,橘黃G 1.0g可增至2g,磷鉬酸或磷鎢酸0.5g,蒸餾水100ml。
(3)蒸餾水漂洗後在95%酒精分色至膠原纖維呈藍色,核呈深紅色。
(4)脫水,透明,封固。
結果:與Mallory法同。但很節省時間。
(五)Masson法
染色步驟:
(1)取新鮮組織固定於Bouin液,或Zenker液,或Helly液,或Carnoy液或其他固定液中,效果皆佳。
(2)石蠟包埋,切片5μm。
(3)切片脫蠟,入5%鐵明礬水溶液24小時,或50℃浸30分鍾。
(4)蒸餾水洗,用Regaud鐵木素染24小時,或50℃染30分鍾。
染液的配法:蘇木精1g,無水酒精10ml,甘油10ml,蒸餾水80ml。
(5)蒸餾水洗,入2.5%鐵明礬水溶液或下液鑒別,至細胞核清晰顯出為止。
染液的配製:95%酒精苦味酸飽和液20ml,95%酒精10ml。
(6)自來水洗10分鍾。
(7)入1%冰醋酸水配製的1%酸性複紅液染5分鍾。
(8)蒸餾水洗,入1%磷鉬酸水溶液脫色,至結締組織褪色,而細胞質呈紅色為度。
(9)入含2.5%冰醋酸的苯胺藍飽和水溶液染2~5分鍾。
(10)蒸餾水洗,入1%冰醋酸水脫去過多的苯胺藍及磷鉬酸,約1~30分鍾。
(11)入含0.1%冰醋酸的無水酒精清洗片刻。
(12)經無水酒精脫水,二甲苯透明,封固。
結果:膠原纖維呈深藍色,細胞核呈黑色,嗜銀顆粒呈黑色或紅色,神經膠質纖維呈紅色。
(六)Masson染色(改變法之一)
染色步驟:
(1)固定同上法,石蠟切片下行至水。
(2)5%鐵礬水溶液媒染8~12小時,或在37℃1小時。
(3)流水衝洗後換蒸餾水漂洗。
(4)Regaud蘇木精液染色8~12小時,或37℃4小時。
染液的配製:蘇木精1g,無水酒精10ml,甘油10ml,蒸餾水80ml。配好後成熟1周即可用。
(5)流水衝洗後入蒸餾水漂洗。
(6)用2.5%鐵礬水溶液分色至核清晰。
(7)蒸餾水漂洗後。入苦味酸-酒精液2分鍾。
染液的配製:飽和苦味酸水溶液20ml,95%酒精10ml。
(8)流水衝洗後在1%酸性複紅的1%冰醋酸水溶液內染色5分鍾。
(9)蒸餾水漂洗後在0.5%磷鎢酸水溶液內分色5~10分鍾,至膠原纖維呈無色,肌肉及紅細胞呈紅色。
(10)入內含2.5%冰醋酸苯胺藍飽和酸液內染色2~5分鍾。
(11)1%冰醋酸水溶液洗去多餘的苯胺藍。
(12)脫水,透明,封固。
結果:膠原纖維呈藍色,肌肉及神經膠質纖維呈紅色,嗜銀顆粒呈黑色或紅色,胞核呈藍黑色。
(七)Masson染色(改變法之二)
染色步驟:
(1)固定與切片,同前。
(2)切片脫蠟下行入水後在地衣紅染液(見AZAN改變法)染色1/2~1小時顯示彈性纖維。
(3)流水衝洗後換蒸餾水漂洗。
(4)Weigert或其他蘇木精液染核15~30分鍾。充分水洗並分色。
Weigert鐵蘇木精染液的配製:甲液:蘇木精1g,無水酒精100ml;乙液:30%氯化鐵4ml,濃鹽酸1ml,蒸餾水100ml。二液分別配製,可放6周。臨用時,取等量的甲液和乙液混合。混合後隻維持24小時。
(5)麗春紅-複紅染液染色5~10分鍾。
染液的配製:麗春紅(ponccaude de xylidine)0.8g(又名Porlceau 2R),酸性品紅0.4g,1%冰醋酸水溶液100ml。
(6)切片經濾紙沾幹後,在0.5%冰醋酸水溶液分色約1/2~1分鍾,再經蒸餾水漂洗。
(7)在亮綠-冰醋酸水溶液染色3~5分鍾。
染液的配製:亮綠1g,1%冰醋酸水溶液100ml。
(8)濾紙沾幹切片,脫水,透明,封固。
結果:膠原纖維呈綠色,彈性纖維呈棕褐色,肌纖維呈紅色,細胞核呈灰黑或藍黑色。
(八)Van Gieson染色
Van Gieson法對顯示結締組織及肌組織有良好效果,標本鮮豔美麗,兩者易區別,主要的缺點是切片不能長久保存。
染色步驟:
(1)組織固定包埋按一般處理。
(2)切片用Weigert鐵蘇木精染細胞核2分鍾,或其他蘇木精亦可,但需增加兩倍染色時間。
染液的配製:甲液:蘇木精1g,95%酒精100ml。乙液:29%氯化鐵溶液4ml,鹽酸(比重11.24濃度25%)1ml,蒸餾水95ml。取甲乙兩液等分混合,混合後隻能用數天。
乙液還可用下法配製:氯化鐵1.16g溶於98ml蒸餾水,加鹽酸1ml。若鹽酸比重為1.19、濃度37%,欲變成比重11.24、濃度25%,則取鹽酸100ml加蒸餾水50ml即可。
(3)自來水充分洗滌約10分鍾以上。
(4)用濾紙吸幹,入以下混合液染色數分鍾。
染液的配法:苦味酸飽和水溶液100ml,1%酸性複紅水溶液5~10ml。
(5)取出用濾紙吸幹,經95%酒精鑒別,至結締組織呈鮮紅色,肌組織呈鮮黃色為止。
(6)經無水酒精,二甲苯,香膠封固。
結果:細胞核呈深棕色,結締組織呈紅色,肌組織及細胞質呈黃色,膠原纖維呈紅色。
(九)Mallory磷鉬酸-蘇木精染色
染色步驟:
(1)固定於Zenker液或Helly液。
(2)石蠟切片入磷鉬酸-蘇木精染12~24小時,或於54℃內染2~3小時。
染液的配法:蘇木精1~1.75g,磷鉬酸1~2g,蒸餾水100ml。
此液1周後成熟,若加1%高錳酸鉀水溶液5ml則立即成熟。
(3)蒸餾水洗,以95%酒精鑒別。
(4)經無水酒精及二甲苯,封固。
結果:結締組織纖維呈深藍色。
或用Mallory磷鎢酸-蘇木精染色也有同樣結果。
染液的配法:蘇木精0.1g,蒸餾水100ml,磷鎢酸2g。溶化後加過氧化氫2ml或0.25%高錳酸鉀水溶液10ml使之氧化。
切片先用碘1g及碘化鉀2g溶於蒸餾水200ml的混合液媒染2~3小時,入硫代硫酸鈉水溶液脫碘,用Mallory磷鎢酸染色2~3小時,以下處理相同。
(十)Lillie猩紅-苦味酸-苯胺藍法
此法對區別結締組織和肌組織效果良好。