2.導尿管采集尿液
用導尿管經尿道插入導尿,可采集到沒有受到糞便、食物汙染的尿液。如果嚴格按無菌操作法導尿,可得到無人為汙染的尿液。施行導尿術,一般不必麻醉動物,選擇與動物相一致的導尿管,先以液狀石蠟潤滑導尿管滑頭端,然後由尿道口徐徐插入,一般均無阻力,當導尿管插入膀胱時,尿液即可從管中流出,再少許進入,用膠布固定好導尿管,把導尿管尾端放入采集容器內即可。
3.壓迫膀胱采集尿液
將動物輕度麻醉後,用手在動物後腹部加壓,手要輕柔有力,當加的壓力足以使動物膀胱括約肌鬆弛時,尿液就會自動由尿道排出。此法適合於家兔、貓、犬等較大動物。
4.穿刺膀胱采集尿液
將動物麻醉、固定後,除掉恥骨聯合之上腹正中線雙側的被毛、消毒。左手觸摸並固定膀胱,右手持注射器,針頭入皮後,應稍改變一下角度,以免穿刺後漏尿。刺入時慢慢深入,邊進邊抽,以抽出尿液為度。也可經針頭導管插入細導管進入膀胱,拔出針頭,留置細導管,用膠布固定好細導管,把細導管尾端放入采集容器內即可。
5.剖腹采集尿液
按膀胱穿刺法做手術前準備,其皮膚準備範圍應更大。剖腹暴露膀胱,直視穿刺膀胱抽取尿液。應避免針頭貼膀胱壁上而抽不出尿液,可通過轉動、後退針頭或提起膀胱壁解決。
6.輸尿管插管采集尿液
剖腹暴露膀胱,將其翻在腹外,在膀胱底兩側找到左右輸尿管,分別用線在左右輸尿管近膀胱處結紮,於結紮上方剪一小口,向腎髒方向分別插入充滿生理鹽水的插管,用線結紮固定好插管,即可見到尿液從插管滴出。此法用於要精確計量單位時間內動物尿排量的實驗。
7.提尾采集尿液
鼠類在尾巴被抓住提起時,有排尿反射,特別是小鼠的這種反射更明顯。要采集少量尿液時,可提起動物,當動物排尿時,用吸管或試管接住尿液。
(二)消化液的采集
1.唾液
(1)刺激法:機械刺激動物口腔或服用乙酰膽堿類藥物,可致動物唾液分泌增加,流涎不止。可用試管接住口腔流出的唾液,或用吸管從口腔內吸出唾液。
(2)插管法:涎腺有三對:腮腺、頜下腺、舌下腺。通過手術暴露唾液腺開口處,然後插入聚乙烯管,當插管到達腺體內部附近時進行結紮,若腺體受到刺激,即有唾液流出。
2.胃液
(1)插胃管法:取少量胃液,可按灌胃法插入胃管於胃內直接抽吸即可得到胃液。
(2)金屬管造口法:將特製的金屬套管的一端安裝在動物的胃大彎處的胃壁上,另一端通至胃壁處。平時將口堵塞,當要收集胃液時就將套管開口打開即可。
(3)食管造口法:將動物食管切斷或直接在食管上造口,當動物進食時,食物進入口腔,但並不進入胃內而從切口或造口處流出體外,胃液等消化液卻大量分泌。這種食管造口假飼配合上述的金屬管造口法就可收集到較純淨的胃液。
(4)製備小胃法:將動物的胃體分離出一小部分,縫合起來形成小胃,然後在小胃上進行金屬管造口法。這樣主胃仍與食管及小腸相連,進行正常消化。而從小胃可收集到較純淨的胃液。
3.膽汁和胰液
主要是經外科手術對膽總管或胰總管插管,即可隨時或定時采集。有膽囊的動物也可采取膽囊造口法采集膽汁。
4.腸液
腸液的采集也應行腸管造口法,將造口固定在腹壁上,即可收集到腸液。
(三)淋巴液的采集
一般隻采集大動物的淋巴液,用外科手術解剖出胸導管或右淋巴管後插管收集淋巴液。
(四)腦脊液的采集
將動物麻醉,側臥固定,使頭尾盡量屈曲,在兩髂骨連線中點稍下方,相當於犬等大動物的第7腰椎間隙處穿刺。穿刺時用左手拇、示指固定穿刺部位皮膚,右手持腰穿刺針垂直進針,當有落空感時,就進入了蛛網膜下隙,此時抽出針芯,可見腦脊液滴出。若無腦脊液滴出,可能是沒有刺破蛛網膜,可向內稍稍進針。若腦脊液滴出太快,要用針芯稍微阻塞,以免顱內壓突然下降或腦疝形成造成動物死亡。采集完畢後,應等量注入生理鹽水以保持顱內壓正常。
九、實驗動物的處死方法
處死實驗動物的方法很多,其處死動物的原則除了考慮安全、簡便、省時、不影響實驗結果外,還要考慮一定的人道問題。處死時應盡量減少動物的痛苦和感官上的不適感。
(一)大、小鼠的處死方法
1.頸椎脫位法
用左手拇、示指用力向下按住鼠頭,右手抓住鼠尾用力向後拉,使頸椎脫位,致脊髓與延髓拉斷,動物立即死亡。
2.斷頭法
用剪刀從鼠頸部將鼠頭剪斷,由於腦脊髓離斷且大量出血,動物很快死亡。
3.擊打法
提起鼠尾,用力摔擊頭部,或用小木錘打擊頭部,動物痙攣並立即死亡。
4.過量麻醉法讓動物吸入過量的乙醚或腹腔注射過量的麻醉藥,都可致動物無痛死亡。
5.放血法
常剪斷動物的股動脈放血致動物死亡。如正在做手術性或解剖性實驗,可剪斷頸動脈、腹主動脈或剪破心髒放血。
6.毒氣法
將動物放在有二氧化碳等毒氣裝置內,讓其中毒死亡。
(二)大動物的處死方法
1.空氣栓塞法
向動物靜脈內注入一定量的空氣,使血液循環發生嚴重阻礙,動物很快死亡。操作時用注射器將空氣快速注入靜脈。一般兔、貓需注入10~20ml,犬需注入70~150ml。
2.放血法
動物輕度麻醉後,用鋒利的刀在股三角區做橫切口,將股動、靜脈全部切斷後立即噴出血液,用濕紗布不斷擦去切口處的血液和凝血塊,同時不斷用自來水衝洗流血,使動、靜脈保持通暢,動物因流血過多而很快死亡。
3.過量麻醉法和毒氣法同大、小鼠的處死方法。
此外,處死動物要考慮到不影響實驗結果這一點。同一實驗的動物,不論是實驗組或對照組,都必須用同一方法處死。如果動物或其組織要送檢,必須注明處死方法。
(陳向華)