生物體內生化代謝活動是在一定的pH條件下進行的。體內pH環境的任何改變都將引起與代謝有關的酸堿電離平衡移動，從而影響生物體代謝的活性。各種生化樣品的分離純化和分析鑒定，也必須選用合適的pH。生化實驗中，常用緩衝溶液來維持實驗體係穩定的pH。
緩衝溶液通常是由一種或兩種化合物溶於溶劑（即純水）所得的溶液。溶液內所溶解的溶質（化合物）稱之為緩衝劑，調節緩衝劑的配比即可得到不同pH的緩衝液。緩衝溶液的正確配製和pH的準確測定，是非常重要的基礎工作，在實驗研究中有著極為重要的意義。
根據Brnsted-Lowry酸堿理論（又稱酸堿質子理論），凡能釋放質子的分子或離子（如：H2O，HCl，NH+4，HSO-4等）稱為酸，凡能接受質子的分子或離子（如：H2O，NH3，Cl-等）稱為堿。強電解質溶於水幾乎全部解離為正負離子，而弱電解質溶於水時，則不完全解離，隻有部分的分子解離出正負離子，其餘以分子形式存在於溶液中。例如，弱酸（HA）及其鹽溶於水時，隻有部分HA解離為H+和A-。以Ka表示該弱酸解離達平衡時HA的解離平衡常數，將HA的pKa定義為-lgKa，將HA溶液的pH定義為-lg［H+］，則可得到Henderson-Hassel-Balch方程。
該方程表示了溶液pH與溶質中可解離基團pKa之間的關係。當［A-］＝［HA］時：pH＝pKa，這就意味著當［HA］有一半解離時，溶液的pH等於pKa，此時，弱酸－堿緩衝體係的pKa即代表緩衝範圍的中點。一個緩衝體係的有效緩衝範圍，通常是在pKa值為中點的兩個pH單位範圍內，即：緩衝劑的有效pH＝pKa±1。所以，當緩衝溶液的pH等於該緩衝劑的pKa值時，緩衝能力最大。在配製緩衝溶液時，要考慮到這一點。
常用緩衝液配製方法見附錄1。一般按比例將兩種緩衝劑溶液混合，並加入所有的成分（如EDTA、DTT、Mg2+等）後，再用HCl或NaOH、KOH調節混合液pH，最後將混合液稀釋至需要的濃度（某些混合液在稀釋後需要測定pH）。
常用緩衝液如下。
1.磷酸鹽緩衝液
磷酸鹽（NaH2PO4、Na2HPO4）是生化試驗研究中使用最廣泛的緩衝劑，由於它們是二級解離，有2個pKa值，所以用它們配製的緩衝液，pH緩衝範圍最寬。
由於低溫時鈉鹽較難溶，而鉀鹽易溶，因此用鉀鹽比鈉鹽好。但是因為SDS（十二烷基磺酸鈉）會與鉀鹽生成難溶的十二烷基磺酸鉀，所以在配製SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的緩衝液時，隻能用磷酸鈉而不能用磷酸鉀。
磷酸鹽緩衝液的優點：①容易配製成各種濃度的緩衝液；②適用的pH範圍寬；③pH受溫度的影響小；④緩衝液稀釋後pH變化小，如稀釋10倍後pH的變化小於0.1。
其缺點：①易與常見的Ca2+、Mg2+以及重金屬離子締合生成沉澱；②會抑製某些生物化學過程，如對某些酶的催化作用會產生某種程度的抑製作用。
2.三羥甲基氨基甲烷N-Tris(hydroxymethyl)aminomethane,Tris緩衝液
Tris緩衝液在生化實驗研究中使用得越來越多，尤其在SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中都已使用Tris緩衝液。Tris緩衝液的常用有效pH範圍是在“中性”範圍，例如：Tris-HCl緩衝液pH＝7.5～8.5；Tris-磷酸鹽緩衝液pH＝5.0～9.0。
按書後附錄1中所列該緩衝液的配製方法，分別配製0.05mol/L Tris和0.05mol/L HCl溶液，然後按表中所列體積混合，即得Tris緩衝液。