一、實訓目標
（1）學會六味地黃丸製備的工藝流程及操作注意事項。
（2）學會六味地黃丸的質量檢查方法。
（3）熟悉六味地黃丸免疫作用的實驗方法。
二、實訓原理
1.丸劑及其製備工藝
蜜丸是我國古代醫藥工作智慧的結晶，六味地黃丸是蜜丸的典型代表，是藥物以煉蜜製成的丸劑，常用塑製法製備。塑製法製備蜜丸劑的工藝流程為：
備料→製丸塊→製丸條→分粒→搓圓→幹燥→整粒→包裝
2.丸劑的質量檢查
水分、重量差異、裝量差異、溶散時限、微生物限度等。本實驗可以從性狀、鑒別、檢查、含量測定、規格等方麵進行質量控製。
3.六味地黃丸免疫作用的實驗方法
驗證藥物對機體免疫力作用效果的實驗方法有很多，比如：小鼠炭粒廓清速率實驗、小鼠耐缺氧實驗、小鼠抗疲勞實驗、藥物誘導小鼠變態反應等。都是通過一係列的手段，使實驗動物處於免疫力低下的狀態，然後給予相應藥物，觀察藥物對免疫力低下狀態的改善和拮抗作用。
三、主要儀器、試藥及實驗動物
儀器：天平、粉碎機、藥篩、顯微鏡、搪瓷盤、烘箱、薄層板、HPLC、微量注射劑、錐形瓶、移液管、超聲儀、一次性注射器、注射針頭、分光光度計、試管等。
試藥：熟地黃、山茱萸（製）、牡丹皮、山藥、茯苓、澤瀉、蜂蜜、水合氯醛液、鹽酸、三氯化鐵乙醇液、對照品、印度墨汁、氫化可的鬆等。
實驗動物：小白鼠60隻。
四、實訓內容與步驟
1.六味地黃丸的製備
【處方】熟地黃160g山茱萸（製）80g牡丹皮60g山藥80g茯苓60g澤瀉60g
【製法】以上6味，粉碎成細粉，過篩，混勻。每100g粉末加煉蜜35～50g與適量的水，泛丸，幹燥，製成水蜜丸；或加煉蜜80～110g製成小蜜丸或大蜜丸，即得。
2.六味地黃丸的質量分析
【性狀】本品為棕黑色的水蜜丸、黑褐色的小蜜丸或大蜜丸；味甜而酸。
【鑒別】（1）取本品粉末少許，置顯微鏡下觀察：澱粉粒三角狀卵形或矩圓形，直徑24～40μm，臍點短縫狀或人字狀。不規則分枝狀團塊無色，遇水合氯醛液溶化；菌絲無色，直徑4～6μm。薄壁組織灰棕色至黑棕色，細胞多皺縮，內含棕色核狀物。草酸鈣簇晶存在於無色薄壁細胞中，有時數個排列成行。果皮表皮細胞橙黃色，表麵觀類多角形，垂周壁略連珠狀增厚。薄壁細胞類圓形，有橢圓形紋孔，集成紋孔群；內皮細胞垂周壁波狀彎曲，較厚，木化，有細疏的細小孔溝。
（2）取本品水蜜丸6g，研碎，或取小蜜丸或大蜜丸9g，剪碎，加矽藻土4g，研勻。加乙醚40mL，回流1h，過濾，濾液揮去乙醚，殘渣加丙酮1mL使溶解，作為供試品溶液。另取丹皮酚對照品，加丙酮製成每1mL含1mg丹皮酚的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2005版附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述兩種溶液各10μL，分別點於同一矽膠Ｇ薄層板上，以環己烷－乙酸乙酯（3∶1）為展開劑，展開，取出，晾幹，噴以鹽酸酸性5%三氯化鐵乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同的藍褐色斑點。
【檢查】應符合丸劑項下有關的各項規定（《中國藥典》2005版附錄Ⅰ A）。
【含量測定】（1）山茱萸按照高效液相色譜法（《中國藥典》2005版附錄Ⅵ D）測定。
色譜條件與係統適用性試驗：以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液（1∶8∶4∶87）為流動相，檢測波長為236nm，柱溫40℃。理論板數按馬錢苷峰計算應不低於4000。
對照品溶液的製備：取馬錢苷對照品適量，精密稱定，加50%甲醇製成每1mL含20μg馬錢苷的溶液，即得。