3.展開
展開缸如需預先用展開劑飽和，可在缸中加入足夠量的展開劑，並在壁上貼兩條與缸一樣高、寬的濾紙條，一端浸入展開劑中，密封頂蓋，一般保持15～30min，使係統平衡或按品種規定操作。
將點好樣品的薄層板迅速放入展開缸的展開劑中，浸入展開劑的深度為距原點0.5～1.0cm（切勿將樣點浸入展開劑中），密封頂蓋，待展開至規定距離（一般為10～15cm），取出薄層板，晾幹，按各品種項下的規定檢測。
展開可以向一個方向進行，即單向展開；也可以進行雙向展開，即先向一個方向展開，取出，待展開劑完全揮發後，將薄層板轉動90°，再用原展開劑或另一種展開劑進行展開；亦可多次展開。
4.顯色與檢視
熒光薄層板可用熒光淬滅法；普通薄層板，有色物質可在日光下直接檢視；無色物質可用物理或化學方法檢視。物理方法是檢出斑點的熒光顏色及強度；化學方法一般用化學試劑顯色後，立即覆蓋同樣大小的玻板，在日光下檢視。
五、注意事項
（1）薄層板的活化與保存自製薄層板和市售薄層板在使用前均應進行活化，活化後的薄層板應立即置於有幹燥劑的幹燥器中保存，保存時間不宜過長，最好隨用隨製，放入幹燥箱中保存僅作為使用前的一種過渡。
（2）供試液的製備溶劑選擇是否適當影響點樣原點及分離後斑點的形狀，一般應選擇極性小的溶劑；隻有在供試品極性較大，薄層板的活性較大時，才選擇極性大的溶劑。除特殊情況外，試液的濃度要適宜，最好控製在使點樣量不超過10μL。
（3）點樣薄層板上樣品容積的負荷量極為有限，普通薄層板的點樣量最好在10μL以下，高效薄層板在5μL以下。點樣量過多可造成原點“超載”，展開劑產生繞行現象，使斑點拖尾。點樣速度要快，在空氣中點樣以不超過10min為宜，以減少薄層板和大氣的平衡時間。點樣時必須注意勿損壞薄層表麵。
（4）點樣環境實驗環境的相對濕度和溫度對薄層分離效果有著較大的影響（實訓室一般要求相對濕度在65%以下為宜），因此應保持試驗環境的相對恒定。對溫度和濕度敏感的品種必須按品種項下的規定，嚴格控製實驗環境的溫度和濕度。
（5）展開展開缸預先飽和可避免邊緣效應，展開距離不宜過長，通常為10～15cm。
（6）按各品種項下要求對檢測方法進行係統適用性試驗，檢測斑點的檢測靈敏度、比移值（Rf）和分離效能應符合規定。
①檢測靈敏度：用於雜質檢查時，采用對照溶液經稀釋若幹倍的溶液與供試品溶液和對照溶液在規定的色譜條件下，在同一塊薄層板上點樣、展開、檢視，前者應顯示清晰的斑點。
②比移值（Rf）：計算從基線至展開斑點中心的距離與從基線至展開劑前沿的距離的比值，按下式得出各斑點的Rf值。
③分離效能：鑒別時，對照品與結構相似的藥物對照品製成的混合對照溶液按規定方法展開後，應顯示兩個清晰分離的斑點。雜質檢查時，雜質對照品與主成分製成的混合對照溶液按規定方法展開後，應顯示兩個清晰分離的斑點，或待測成分與相鄰的斑點應清晰分離。
六、考核標準
優秀:能準確、熟練快速地完成自製薄層板，點樣、展開、顯色檢視操作步驟正確。口試中能準確回答問題，思路清晰；筆試和回答問題準確率高。總體答對率在90%以上。
合格:操作步驟不出現差錯，操作正確率在60%以上。口試中能較準確回答問題，思路較清晰；筆試和回答問題準確率尚可。總體答對率在60%以上。
不合格:達不到合格的要求。