正文 第九節 畜禽腎髒製劑(1 / 1)

傳統的腎素成分由各器官分泌,在維持心血管功能穩定,特別對動脈血壓的調節方麵有意義。近年來大量研究說明,腎素和血管緊張素(Ang)可以在許多局部組織合成,如血管、心髒、腎、腦、肺、腎上腺、子宮、卵巢、睾丸、垂體腎上腺等局部Ang的濃度可能超過血管內的濃度,它通過旁分泌或自分泌作用調節器官的生理功能。

下麵以酰化酶Ⅰ的提取為例介紹。

酰化酶I是一種在動物髒器中分布廣泛的生物酶類,用於酶工業或製藥加工中的水解過程。目前,利用酰化酶可以大規模分離人工合成的消旋氨基酸。在哺乳動物中以腎髒中含量最為豐富,所以以豬的腎髒製備酰化酶。

(一)製備工藝

1.工藝流程

2.工藝要點

(1)原料修割絞碎取豬腎髒清洗,修去脂肪、結締組織,絞碎。

(2)提取糜漿加入2倍體積的水,在4℃左右攪拌提取30min,然後置於冷凍離心機中,以3000r/min的轉速離心30min,分出離心液,殘渣再同樣提取3次,合並離心液,用雙層紗布壓濾,收集濾液備用。

(3)沉澱雜蛋白濾液用1∶6鹽酸調pH至5.0左右。然後於離心機(4000r/min)離心30min,收集離心液,立刻用1∶6鹽酸調節pH至6.5。

(4)鹽析量取上述澄清液,在攪拌條件下,按每升加266g固體硫酸銨,使硫酸銨飽和度達45%,隨時校pH為6.5,然後靜置過夜,次日虹吸出上清液(用於製備酰化酶Ⅱ),鹽析沉澱4℃下壓濾至幹。

(5)透析把鹽析物用少量的無離子水溶解,然後裝入透析袋對無離子水透析。用1mol/L BaCl2檢測,至無硫酸根時停止透析。離心除去變性蛋白,收集離心液,即為酰化酶I粗品溶液。

(6)丙酮分級沉澱透析液用少量的4℃無離子水稀釋,在4℃或在冰鹽浴下用1∶10的鹽酸調節pH至6.0,在攪拌下,加入0.5倍體積的冷丙酮(-15℃),立刻於離心機上(4000r/min)離心20min,收集黃色的上清液。在4℃下,緩緩加入0.6倍體積的冷丙酮(-15℃),立即於離心機上(4000r/min)離心20min。收集沉澱。

(7)透析、幹燥將丙酮沉澱物用少量無離子水溶解,裝入透析袋對0.01mol/L、pH為7.0的磷酸鹽緩衝液透析2~3h(4℃以下),保留液於離心機上4000r/min離心20min。除去不溶物,收集離心液,冷凍幹燥即得精製酶粉。

(二)酰化酶I質量標準與檢驗方法

酰化酶I質量標準與檢驗方法要符合衛生部藥典標準二部六冊規定。