正文 第三節 畜腦製劑(2 / 3)

(2)乙醇沉澱法工藝要點

①原料處理:取新鮮或冷凍大腦或骨髓50kg,去膜及血絲等組織,絞碎。

②提取膽固醇:原料用丙酮浸泡5次,每次用丙酮60L,時間為4.5h,不斷攪拌。過濾,濾液用於製備膽固醇,濾渣真空幹燥。

③提取卵磷脂:將幹燥物料渣用95%乙醇90L,在攪拌下於35~40℃提取12h,過濾後再提取一次。濾液用於製備卵磷脂,濾渣吹幹或於真空幹燥器中幹燥。

④提取腦磷脂:將幹燥渣浸入工業乙醚60L中,在攪拌下提取2h,過濾後再提取一次,合並濾液,濾渣棄去。

⑤濃縮:將乙醚溶液濃縮至200mL,0℃放置12h。

⑥沉澱:濃縮液離心,取上清液傾入60℃的98.5%乙醇2L中,沉澱、過濾。

⑦溶解、沉澱:將沉澱溶於乙醚200mL中,在0℃靜置、離心,清液在熱乙醇中沉澱,如此反複,至溶解在乙醚中不再產生沉澱為止。過濾得乙醇沉澱物,真空幹燥,即得腦磷脂產品,保存於棕色瓶中。

(3)氯化鈣沉澱法工藝流程

(4)氯化鈣沉澱法工藝要點

①提取:大腦100kg,加300kg乙醚,加熱至沸,過濾。濾渣再提取一次。

②濃縮、溶解:濾液濃縮至原體積的1/3,加3倍量80%以上的乙醇,水浴加熱,待其全部溶解,冷室過夜、分層、過濾。溶解液供製備卵磷脂及膽固醇用。沉澱為粗磷脂。

③沉澱:粗磷脂加少量水,加0.5%CaCl2,加熱100℃,取沉澱、幹燥,得粗腦磷脂。

④精製:粗腦磷脂分散於3倍量95%以上的乙醇中,送冷室沉澱4h,過濾,沉澱用乙醇反複處理5次。再將沉澱溶於乙醚中,過濾,加等量95%乙醇或丙酮,沉澱出腦磷脂,過濾,真空幹燥。

2.卵磷脂提取工藝

卵磷脂提取以大腦或骨髓為原料,首先提取出腦磷脂,以提取腦磷脂後的乙醇溶液為原料。

(1)氯化鎘沉澱法工藝流程

(2)氯化鎘沉澱法工藝要點

①濃縮:將含有卵磷脂的乙醇溶液真空濃縮至原體積的1/3。濃縮液冷室過夜、過濾,得濾液。

②沉澱、除雜質:於濾液中加入足夠的氯化鎘飽和溶液,至使卵磷脂沉澱完全。靜置分層,濾取沉澱物,加2倍量(質量比)乙醚洗滌,離心收集沉澱,如此重複8~10次。

③溶解、沉澱雜質:取離心沉澱物,懸浮於4倍量(V/W)氯仿中,振搖,直至形成微渾濁液為止。加入含25%氨水的甲醇溶液(即濃氨水25mL溶於甲醇75mL中),直至形成沉澱,離心。

④濃縮、脫水:清液真空濃縮近幹。將濃縮物溶於無水乙醚中,真空濃縮,重複二次以除去水分。

⑤沉澱、幹燥:將濃縮物溶於最少的乙醚中,然後倒入約3倍量(體積比)丙酮中。靜置過濾,沉澱物真空幹燥即得。

(3)丙酮沉澱法工藝流程

(4)丙酮沉澱法工藝要點

①提取:取大腦幹,用3倍量丙酮循環浸漬20~24h,濾液用於製備膽固醇。濾餅殘渣蒸發除去丙酮,加乙醇2~3倍,提取4~5次,合並乙醇提取液(殘渣作腦磷脂原料),真空濃縮,趁熱放出濃縮液。

②沉澱、幹燥:濃縮液加入半倍量乙醚,不斷攪拌,放置2h,使白色不溶物完全溶解,過濾,取上層乙醚澄清液,在急速攪拌下倒入丙酮中(丙酮量為粗卵磷脂質量的1.5倍),析出沉澱,濾去乙醚、丙酮混合液,得油膏狀物。以丙酮洗兩次,真空幹燥除去乙醚及丙酮,得成品。

3.羊大腦製備卵磷脂

(1)工藝流程

(2)工藝要點

①提取膽固醇:新鮮或冷凍羊大腦,絞碎。用工業丙酮浸漬三次(第一次3倍量,第二次2.5倍量,第三次1.5倍量),每次24h,經常攪拌過濾和壓榨(丙酮液作為製備膽固醇原料),濾渣吹幹。

②提取、濃縮:濾渣用乙醚提取3次(用量分別為3倍、2.5倍、1.5倍),每次24h,經常攪拌,過濾後,濾渣壓榨,廢渣棄去。合並濾液,濃縮。