2.胃蛋白酶的應用和製備技術
胃蛋白酶(pepsin)是一組彼此密切相關的天冬氨酸蛋白酶類,分子質量31~36ku,協同形成脊椎動物胃液的主要蛋白酶活性。胃蛋白酶已作為優良的消化藥廣泛推廣,主要劑型有含糖胃蛋白酶、胃蛋白酶片、與胰酶和澱粉酶配伍製成多酶片。在工業上,胃蛋白酶廣泛應用於方便食品,如奶酪、口香糖的加工,近年來,該酶在啤酒、果酒等澄清方麵也顯示了應用潛力。胃蛋白酶是第一個得到結晶的酶,分離純化起步較早,但工藝技術長久以來沒有新的重大突破。目前,國內對胃蛋白酶的分離純化方法主要是采用比較經典的有機溶劑提取法和硫酸銨鹽析分離,得到混合胃酶(包括胃蛋白酶A、B、C、D),然後采用層析的方法進行純化,如趙永芳等利用聚-L-賴氨酸-瓊脂糖親和色譜介質分離豬胃蛋白酶,得到酶活為16480U,但層析方法沒有實現工業化生產。國外胃蛋白酶的分離純化研究較早,主要集中在20世紀60~70年代,並將親和層析及離子交換等方法應用於純化。隨著親和層析技術的應用,Nevaldine和Kassell應用親和層析(聚-L-賴氨酸共價連接Sepharose 4B)方法純化了羊胃蛋白酶,此法得到的羊胃蛋白酶pH1.0~4.5,20℃,24h不失活,在純化時用到了透析及冷凍幹燥,大大縮短了純化時間。
3.胰蛋白酶的應用和製備技術
胰蛋白酶(Trypsin)是存在於動物胰髒中的一種水解蛋白酶,有高度的特異性,可限定分解蛋白質,可用於一級結構解析。胰酶可以用來治療由於胰腺功能不足引起的消化不良、食欲不振及肝、胰髒疾患引起的消化障礙。臨床上常用作抗炎劑,可迅速溶解血凝塊。胰蛋白酶及糜蛋白酶等還有擴張血管作用,在外科手術上被廣泛應用。另外,胰蛋白酶在皮革加工中有廣泛的用途。胰蛋白酶和胰酶可以從豬、牛、羊等動物的胰髒中提取。傳統的分離提取方法有硫酸銨分級沉澱、親和層析等,生產工藝相對成熟。國內外對胰蛋白酶的固定化作用研究比較多,固定化胰蛋白酶用於轉肽反應,是人胰島素固相酶促半合成轉化反應的催化劑。
(二)多糖類物質及其他成分的製備現狀
畜禽髒器中含有具有特殊生理功能的多糖類、肝素和類肝素、膽酸、膽紅素等物質。豬、羊小腸可做成腸衣,剩下的腸黏膜可生產抗凝血、抗血栓、預防心血管疾病的藥物,如肝素鈉、肝素鈣、肝素磷酸酯、低分子肝素等,豬的十二指腸可用來生產治療冠心病的藥物冠心舒、類肝素等。豬、牛、羊膽汁在醫藥上有很大價值,可用來製造粗膽汁酸、脫氧膽酸片、膽酸鈉、降血壓糖衣片、人工牛黃、膽黃素等幾十種藥物。
1.肝素的分離製備技術
肝素作為一種重要的抗凝血藥物,在臨床上得到了廣泛的應用。我國目前以生產粗品肝素為主,也是世界上肝素主要出口國家之一,2005年我國肝素鈉出口數量為96.97t,出口金額為7527.32萬美元,2006年出口99.344t,創彙金額突破1億美元。粗品肝素的提取技術包括鹽解、吸附、洗滌、洗脫、分離、沉澱、幹燥等,我國肝素產品效價一般在80~120U/mg,而國外生產的肝素效價一般在200U/mg以上。北京大學的周先琬研究采用酶水解法精製肝素鈉,取得了較好的效果,粗肝素的效價為50~120U/mg,收率2萬~9萬U/kg腸黏膜,在製備中測定酶解液肝素含量一般在10萬U/L以上。張昌敬等用DEAE- Sephacel與Sephadex G-50純化豬肺源肝素,並進行了比較,發現DEAE-Sephacel純化效果優於Sephadex G-50,說明肝素純化過程中,離子交換吸附要好於凝膠過濾。