（2）提取把收集的血球用9g/L NaCl溶液洗三遍（每次用為血球2倍體積的氯化鈉溶液洗），然後加入蒸餾水（和牛血等量的水），在0～4℃條件下攪拌溶血30min，再緩慢加入溶血的血球0.25倍體積的95%乙醇和0.15倍體積的氯仿（乙醇和氯仿要事先冷卻至4℃以下），攪拌均勻，靜置20min，置於離心機中離心30min，收集上清液，棄去沉澱。
（3）沉澱在上清液中加入2倍體積的冷丙酮，攪拌均勻，於冷處靜置20min，離心收集沉澱。沉澱物用1～2倍體積的水溶解，在55℃水浴中保溫15min，離心收集上清液。再用2倍冷丙酮使上清液沉澱，靜置過濾。然後離心收集沉澱，上清液可用於回收丙酮。
（4）分離純化把以上沉澱溶於pH 7.6，2.5μmol/L K2HPO4-KH2PO4緩衝液中，用離心法除去雜質，收集上清液準備上柱（DEAE-Sephadex A-50）。先把DEAE-Sephadex A-50裝入3cm×40cm的柱中（柱長40cm，柱內徑3cm），用pH 7.6，2.5μmol/L K2HPO4-KH2PO4緩衝液上柱，等流出液的pH為7.6時，將樣品上柱，用pH 7.6，2.5μmol/L K2HPO4-KH2PO4緩衝液進行梯度洗脫，收集具有SOD的活性峰，將洗脫液倒入透析袋中，在蒸餾水中進行透析，然後將透析液經超濾濃縮後，冷凍幹燥即為SOD產品。
（三）從豬血中提取SOD
1．工藝流程
2．工藝要點
（1）分離血球取新鮮豬血，事先加入為豬血體積1/7的38g/L檸檬酸三鈉溶液，攪拌均勻，以3000r/min的速度離心15min，除去黃色血漿，收集紅血球。
（2）除血紅蛋白紅血球用兩倍9g/L NaCl溶液離心洗滌三遍，然後向洗淨的紅血球中加入等體積去離子水，劇烈攪拌30min，於0～4℃靜置過夜。再向溶血液中分別緩慢加入0.25倍體積的預冷乙醇和0.15倍體積的預冷氯仿，攪拌15min左右，靜置30min，然後用離心法除去沉澱，收集微帶藍色的清澈透明粗酶液體。
（3）沉澱向上述粗酶液中加入等量冷丙酮，攪拌均勻，即有大量白色沉澱產生，靜置30min，用離心法收集沉澱物。
（4）熱變把沉澱物溶於pH 7.6，2.5μmol/L K2HPO4-KH2PO4緩衝液中，加熱到55～65℃，恒溫20min，然後迅速冷卻到室溫，離心收集上清液，棄去沉澱物。在上清液中加入等體積的冷丙酮，靜置30min，離心分出沉澱，脫水幹燥即得粗品SOD，可用於化妝品或食用。
（5）DEAE－Sephadex A-50分離純化把沉澱溶於pH 7.6，2.5μmol/L K2HPO4-KH2PO4緩衝液中，用離心法除去雜質；上清液上DEAE-Sephadex A-50柱，用2.5～50μmol/L K2HPO4-KH2PO4緩衝液中進行梯度洗脫，收集具有SOD的活性峰。將洗脫液裝入透析袋中，在蒸餾水中透析，超濾濃縮透析液，然後冷凍幹燥即得精品。
（四）注意事項
①牛血SOD對熱穩定，豬血SOD對熱敏感。因此在分離過程中溫度應控製在5℃左右，最好在0℃，時間不要超過4d。
②分離出的紅血球經生理鹽水洗滌後，如暫不用，可冷凍保存，不影響其酶活力。
③上柱分離純化要注意pH和鹽濃度，pH控製酶分子的帶電狀態。鹽濃度控製結合鍵的強弱。為了得到高純度的SOD，多采用梯度洗脫法，也可用DE-32、CM-32等作交換劑。
④有機溶劑用量應適當，在有機溶劑存在下，可有效地沉澱蛋白質，但應控製溫度，方可達到最佳分離效果。
⑤牛血SOD在pH為5.3～9.5範圍內比較穩定，豬血SOD在pH為7.6～9.0範圍內比較穩定，因此在提取過程中應注意掌握SOD酶的最適pH。
（五）SOD質量標準與檢驗方法
1.質量標準
SOD質量標準應符合GB/T 5009.171—2003《保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的測定》中“食品中SOD最低檢出濃度為0.033u/mL”的要求。
2．SOD活性檢驗
SOD活性檢驗國內外尚無標準檢測方法，目前比較經典的方法是黃嘌呤氧化酶—細胞色素法，簡稱作Cytc法。該方法主要是在有氧條件下，黃嘌呤氧化酶催化黃嘌呤或次黃嘌呤發生氧化反應生成尿酸，同時產生超氧陰離子，氧化性高鐵Cytc被超氧陰離子還原成亞鐵Cytc。後者在550nm波長處有最大吸收。SOD抑製超氧陰離子對高鐵Cytc的還原性，因而測定高鐵Cytc在加入SOD前後的速度變化可計算出SOD的活力。在特定條件下引起高鐵CytC還原速度50%的抑製所需SOD的量定為1個活力單位。
實驗條件為：高鐵Cytc50μmol/L，黃嘌呤50μmol/L，EDTA 100μmol/L，磷酸鉀緩衝液50μmol/L，pH為7.8，反應溫度為25℃，黃嘌呤氧化酶必須過量（5μmol/L）使Cytc的吸收度變化為0.025/min。本測定法是SOD一種可靠的分析方法。
3．SOD純度檢驗
可用聚丙烯酰胺凝膠電泳來測定SOD純度，看其相對分子質量32000左右的一條帶是否同標準品相同。
四、血液中提取唾液酸
唾液酸是一種糖蛋白，其功能為改變細胞表麵的負電性，防止紅細胞聚集，可決定細胞的相互識別和結合，在醫學上具有類似阿司匹林消炎的作用。
（一）工藝流程
（二）工藝要點
1．分離血清
將采集的新鮮豬血用離心機以3000r/min，離心15min，分離血清，將血清移入鍋中，加入4倍於血清量的乙醇，攪勻，煮沸30～50min，然後用白細布過濾，收集白色沉澱。
2．洗滌
用等體積的乙醇洗滌沉澱一次，再用0.005mol／L的H2SO4洗滌沉澱至pH為2.5左右，然後過濾，收集沉澱。
3．水解
將以上洗滌過的沉澱，用0.05mol／L的H2SO4溶解，加熱到80℃，攪拌水解1h左右，然後過濾，收集水解液。沉澱物再用上法水解一次，合並兩次水解液。
4．吸附
將水解液移入搪瓷桶，用0.3g/mL NaOH溶液調節pH至5.0左右，然後用離心法收集離心液，離心液先經732樹脂柱吸附，流出液再經201×8陰離子樹脂柱，然後用去離子水洗陰離子柱至流出液為中性。
5．洗脫
將樹脂用0.3mol／L的甲酸洗脫，流速控製在0.5mL／min，收集洗脫液。
6.濃縮-幹燥
將洗脫液於40℃下減壓濃縮，除盡甲酸，然後幹燥，即得產品。
（三）唾液酸質量標準與檢驗方法
1.唾液酸的質量標準
目前，關於唾液酸的質量標準還沒有國家級版本。
2.唾液酸含量檢測要求
唾液酸含量檢測方法按照《中國藥典》三部（2005）附錄中的要求（第30頁）進行檢測。
①常用間苯二酚顯色法：本法係用酸水解方法將結合狀態的唾液酸變成遊離狀態，遊離狀態的唾液酸與間苯二酚反應生成有色化合物，再用有機酸萃取後，測定唾液酸含量。
②目前多采用常用高效液相色譜法測定唾液酸的含量。