(一)原理
Vidas全自動免疫分析儀,是用熒光分析技術通過固相吸附器,用已知抗體來捕捉目標生物體,然後以帶熒光的酶聯抗體再次結合,經充分衝洗,通過激發光源檢測,即能自動讀出發光的陽性標本,其優點是檢測靈敏度高,速度快,可以在24~48h的時間內快速鑒定沙門氏菌、大腸杆菌O157∶H7、單核李斯特菌,空腸彎曲杆菌和葡萄球菌腸毒素等。
以免疫技術捕獲目標微生物,應用熒光技術進行全自動檢測。抗原鑒別是基於在VIDAS儀器內進行的酶聯熒光免疫分析。Mini-VIDS檢測係統具有靈敏度高,特異性強,操作簡單方便等優點。這種mini-VIDAS全自動熒光酶標免疫測試係統采用ELFA技術為檢測原理,ELFA與熒光讀數相結合。抗原(細菌、蛋白)的檢測是就用一種夾心技術,包被針上有抗體包被,與所測得的熒光標本中抗原的含量成正比。它由電腦控製,自動地完成全部分析過程。底物與熒光物質結合,熒光強弱與標本中被測物濃度相關。由於同時作標本對照,所以係統本身自動消除由標本產生的非特異熒光。經掃描後讀數與標準比較計算出標本值,根據臨界值判斷結果並自動打印報告單。
像吸液管的裝置是固相容器(SPR),在分析中既作為固相也作為吸液器。SPR包被有高特異的單克隆抗體混合物。將一定量的增菌肉湯加入試劑條,肉湯中的混合物在特定時間內循環於SPR內外。如果有抗原存在,則與包被在SPR內的單克隆抗體結合,其他沒有結合上的化合物被衝洗掉。結合有堿性磷酸酶的抗體在SPR內外循環與結合在SPR內壁上的抗原結合,最後的衝洗步驟將沒有結合的酶標抗體衝洗掉。底物4-甲基傘形磷酸酮被SPR壁上的酶轉換成熒光產物——4-甲基傘形酮。熒光強度由光學掃描器測定。實驗結果由計算機自動分析,產生基於熒光測試的試驗值與標準相比較後打印出每一個被測樣品的陽性或陰性結果。
(二)係統特點
(1)結果準確應用免疫夾心方法,對每個標本做兩次免疫反應,大大提高檢測的特異性,從而保證檢測結果的可靠性。特大的固相吸附表麵積,提高了免疫捕獲的數量,增加靈敏度。熒光檢測方法,靈敏度比可見光方法高出1 000倍。
(2)檢測快速上機檢測時間40~70min。
(3)檢測項目多。
(4)使用靈活獨立運行的檢測倉可隨機進行樣品的檢測。可在不同的檢測倉檢測相同或不同的項目,也可在同一檢測倉檢測相同或不同的項目。
(5)特異性強標本不需分離出目標微生物即可上機檢測。
(6)避免交叉汙染沒有采樣針,可避免標本之間交叉汙染;樣品不與儀器接觸,儀器內沒有抽吸樣品的管路,杜絕了標本對環境的汙染。
(7)全自動化、操作簡便標本加入試劑條啟動儀器後,便可自動完成全部檢測過程並自動打印報告。所有免疫試劑都已配製成可直接使用的形式。
(8)穩定性高試劑有效期長,14d內隻需做一次質控。
(9)可檢測單核增生李斯特菌、彎曲菌、大腸杆菌O157∶H7、沙門氏菌、葡萄球菌腸毒素。
四、API細菌鑒定係統
常用係統為API(Analytical profile index)system,內含一塑膠帶,配20個獨立細管(Microtube),每管含不同的化學物質及脫水培養基,當受試菌的懸浮液接種後,培養基即水化,覆蓋塑膠帶以防水分蒸發,由細菌在其中生長的生化反應造成顏色變化,可配合鑒別圖表與電腦輔助係統以鑒定菌種。
API係統包括試劑條和數據庫,試劑條通常包含20個微量生化試驗。目前API係列提供的16個產品,鑒定範圍涵蓋幾乎所有的細菌群,超過550個不同的種,可鑒定腸杆菌科、弧菌科、非發酵革蘭氏陰性杆菌、葡萄球菌、微球菌、厭氧菌、鏈球菌和相關細菌。API試劑條在1970年創造出來,使細菌學發生了革命性變化,將操作繁瑣、解釋冗長的傳統方法微量化和標準化,將生化試驗試劑條和數據庫結合起來。API使鑒定工作變得容易、快速和安全。API的創新得益於數值鑒定法的發展。這種計算方法使得開發更快、更準確的鑒定軟件成為現實。
API係統使微生物有一個精確的鑒定標準,不會因為所使用生化培養基不同而鑒圖15-9API細菌鑒定係統定出不同的菌名。由於基層實驗室無法準備各類培養基而不能詳細鑒定,但隻要使用現成API係統,就可以增加檢驗對細菌的鑒定能力。常規雙歧檢索法對非發酵菌分屬采用鞭毛染色時,遇到無鞭毛的不動杆菌屬有時很難確定染色是否成功,由於鞭毛染色操作技術要求相對較高,這時采用API20NE顯示了極大便利,隻要革蘭氏染色、氧化酶、OF初定非發酵菌後,接種到API20NE板條上即可解決。
API鑒定結果編碼代表了細菌生物型號碼,以此可作為流行病病原學追蹤的途徑。在一起疫情或細菌性食物中毒的病原學檢驗中同時檢出多株同一種細菌,並為相同的號碼,可認為是來自於一個同源株即相同的生物型。