1980年Luben與Molle證明,在體外培養10d的小鼠胸腺細胞能夠產生淋巴因子,並能代替在體外培養中產生初次免疫(Primary immunization,也稱原發性免疫)反應所需要的免疫T細胞。他們應用這種胸腺細胞培養液(稱為條件培養液)加到小鼠脾細胞培養物中,並加入抗原(淋巴因子-破骨細胞激活因子)刺激脾細胞產生免疫反應,隨後用這種細胞與鼠骨髓瘤細胞雜交而產生破骨細胞激活因子的單克隆抗體,建立了體外初次免疫反應,縮短了在體內免疫的時間。1978年Miller與Lipman應用EB病毒轉型人的B淋巴細胞產生單克隆抗體,使雜交瘤單克隆抗體技術向前邁進了一步。
四、單克隆抗體技術在食品檢測中的應用
單克隆抗體在食品檢測中的最大優點是特異性強,不易出現假陽性,在食品檢驗中具有廣闊的應用前景。目前,人們已經製備出了各種經食品傳播和引起食物中毒的細菌及毒素,真菌毒素,病毒、寄生蟲、農藥、激素等的單克隆抗體,並建立了檢測方法。
磺胺二甲嘧啶是畜禽生產中常用的抗菌藥物,但在飼料中長期添加或濫用可導致動物性食品中的藥物殘留,人食用含有磺胺二甲嘧啶殘留的動物性食品後,會引起再生障礙性貧血,並有致癌等毒副作用。克侖特羅是畜禽生產中嚴格禁用的β-興奮劑類藥物,俗稱瘦肉精,人食用含有克侖特羅殘留的動物性食品後,會產生骨骼肌振顫、心跳過速、頭痛等不良反應,嚴重的甚至危及生命。歐美各國和我國均將這兩種藥物列為獸藥殘留監控的重點。目前尚無檢測磺胺二甲嘧啶和克侖特羅殘留的國產試劑盒,殘留監控中主要使用進口的試劑盒,檢測成本高,推廣難度大。國內研製出了用於動物性食品中磺胺二甲嘧啶殘留檢測的單克隆抗體試劑盒和克侖特羅殘留檢測的多克隆抗體試劑盒。經有關單位進行複核和應用後表明,該項目研製出的試劑盒靈敏度高,準確度好、特異性強,磺胺二甲嘧啶單克隆抗體試劑盒檢測限達1.3μg/kg,遠遠低於聯合國食品法典委員會和我國農業部製定的磺胺類藥物殘留限量標準(100μg/kg)。克侖特羅多克隆抗體試劑盒檢測限為0.1μg/kg,達到我國農業部規定的檢測要求。通過與國外試劑盒的對比試驗,該項目研製出的兩個試劑盒的各項技術指標均達到國外同類試劑盒的水平,填補了國內空白。磺胺二甲嘧啶和克侖特羅試劑盒成本低,與常規儀器檢測方法相比,具有特異性強,儀器化程度低,樣品前處理簡單,檢測時間短,可同時檢測多個樣品的優點,適用於現場監控和大規模樣本的快速篩選,在實際生產中具有廣闊的應用前景。
另外,單克隆抗體快速檢測技術,可對農產品中農藥及激素殘留快速檢測,在10min內快速檢測有機磷類、氨基甲酸酯類、有機氯類、擬除蟲菊酯類及激素類的殘留量,為農產品的優質、安全生產提供技術支持,為國家實施的“無公害食品行動計劃”提供快速檢測技術和手段。
沙門氏菌是肉品汙染中一種典型的病原微生物。目前出現的許多快速檢測方法是利用酶免疫方法。最新的檢測方法是采用特殊材料製成固相載體,聚酯布結合單抗放置在層析柱的底部富集鼠傷寒沙門氏菌,然後直接做斑點印跡試驗;還有用單抗結合到磁性粒子(直徑28nm)檢測卵黃中的腸炎沙門氏菌,英國公司最新推出了一種全自動沙門氏檢測係統,其原理是將捕捉抗體包被到凹形金屬片的內麵上,吸附被檢樣中的沙門氏菌。僅需把樣品加到測定試劑孔中,其餘全部為自動分析,僅45min,比傳統的方法省時、方便。人們還製出了單核增生李斯特菌的單克隆抗體,用單抗ELISA檢測該菌。
食品在儲藏過程中會受到黴菌等微生物的汙染,其結果不僅導致感官品質和營養價值的降低,更重要的是某些黴菌能產生毒素。對黴菌的檢測一般采用培養、電導測量、測定耐熱物質如幾丁質以及顯微觀察等,均繁瑣而費時,現在已從青黴、毛黴等黴菌中提取耐熱性抗原製成單克隆抗體,用ELISA方法可檢出加熱和未加熱的食品中的黴菌。